[发明专利]高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法

说明书

本发明公开了高效液相色谱‑串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，以该方法测定牛羊肌肉、肝、肾组织中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素、替米考星、泰乐菌素残留量，用Mcllvaine‑Na2EDTA及0.1vt％甲酸乙腈溶液提取，正己烷去除脂肪，所得上清液经HLB固相萃取柱净化，0.1vt％甲酸甲醇及0.1vt％甲酸水洗脱，浓缩后以流动相复溶，高效液相色谱‑串联质谱法测定，用空白样品基质加标外标法定量，同时测定6种药物残留，高效且准确。

技术领域

本发明涉及动物产品药物残留的检测技术领域，更具体的说是涉及一种高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法。

背景技术

畜牧养殖过程中，作为预防和治疗动物疾病用药，抗生素等药物常常在饲料添加剂中使用，由于用药不规范以及对用量没有明确的界线，从而使得药物大量地在动物身上使用并在动物机体组织中残留，对动物性食品安全及社会公共卫生造成危害。

恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素、泰乐菌素、替米考星是牛羊等牲畜饲养过程中的常用药物，由于各药物之间物理化学性质差别较大，现有肉制品中药物残留分析方法一般按照化学结构相类似的同族药物开发，检测方法专属性强、灵敏度高以满足动物性食品中药物残留限量不断降低的要求。随着人们食品安全意识的提高和国际贸易往来的增加，一批货物经常需检测许多种类的药物残留，按照传统的分析方法，需要较长的检测周期，较多的人力和物力，检测成本高，不能满足目前药物种类不断增加，分析通量不断提高的需求。

因此，如何提供一种可同时检测多种药物残留的方法是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，包括以下步骤：

步骤一：样品中待测药物的提取

称取2.5g组织样品，精确到0.01g，置于50mL聚丙烯离心管中，加入Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液10mL，涡旋振荡2min，再加入10mL 0.1vt％甲酸乙腈和10mL正己烷，涡旋振荡2min，超声辅助提取30min，4℃下6000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余上清液转入另一50mL聚丙烯离心管中，样品残渣重复上述提取步骤，合并两次提取的上清液；

步骤二：目标待测物的净化、富集

HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL水进行活化，取步骤一的提取液以＜1mL/min的流速通过HLB固相萃取柱，先后加入10mL0.1vt％甲酸甲醇和10mL0.1vt％甲酸水进行洗脱，收集洗脱液，在真空离心浓缩仪中35℃、2000r/min浓缩挥发至干燥，再以1mL 0.1vt％甲酸水-甲醇以体积比＝9:1的比例混合后复溶残渣，经0.22μm滤膜过滤后供HPLC-MS/MS检测；

步骤三：检测

(3.1)基质匹配标准溶液和步骤二净化富集后的样品溶液在设定的液相色谱-质谱条件下进样，判断样品中是否存在相应的目标待测物，需要满足如下条件：样品溶液中出现的质量色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液中相应药物的保留时间一致，允许偏差±2.5％，该色谱峰所对应的药物在设定质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的基质匹配标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过设定的规定，则确定含有该药物；

(3.2)在上述相同条件下，以质量浓度X为横坐标，峰面积的值Y为纵坐标，绘制5点基质匹配标准溶液工作曲线，按外标法计算试样中药物的残留量，基质匹配标准溶液及样品溶液中目标物响应值均应在仪器检测的线性范围内。

进一步的，所述的6种药物为恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素、泰乐菌素和替米考星。