[发明专利]高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法

权利要求书

1.高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：样品中待测药物的提取

称取2.5g组织样品，精确到0.01g，置于50mL聚丙烯离心管中，加入Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液10mL，涡旋振荡2min，再加入10mL0.1vt％甲酸乙腈和10mL正己烷，涡旋振荡2min，超声辅助提取30min，4℃下6000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余上清液转入另一50mL聚丙烯离心管中，样品残渣重复上述提取步骤，合并两次提取的上清液；

步骤二：目标待测物的净化、富集

HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL水进行活化，取步骤一的提取液以＜1mL/min的流速通过HLB固相萃取柱，先后加入10mL0.1vt％甲酸甲醇和10mL0.1vt％甲酸水进行洗脱，收集洗脱液，在真空离心浓缩仪中35℃、2000r/min浓缩挥发至干燥，再以1mL0.1vt％甲酸水-甲醇以体积比＝9:1的比例混合后复溶残渣，经0.22μm滤膜过滤后供HPLC-MS/MS检测；

步骤三：检测

(3.1)基质匹配标准溶液和步骤二净化富集后的样品溶液在设定的液相色谱-质谱条件下进样，判断样品中是否存在相应的目标待测物，需要满足如下条件：样品溶液中出现的质量色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液中相应药物的保留时间一致，允许偏差±2.5％，该色谱峰所对应的药物在设定质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的基质匹配标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过设定的规定，则确定含有该药物；

(3.2)在上述相同条件下，以质量浓度X为横坐标，峰面积的值Y为纵坐标，绘制5点基质匹配标准溶液工作曲线，按外标法计算试样中药物的残留量，基质匹配标准溶液及样品溶液中目标物响应值均应在仪器检测的线性范围内。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，其特征在于，所述的6种药物为恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素、泰乐菌素和替米考星。

3.根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，其特征在于，

所述的液相色谱条件为：

a)色谱柱：AgilentC18，1.8μm，2.1mm×50mm或相当者；

b)进样量：1μL；

c)流速：0.3mL/min；

d)柱温：35℃；

e)流动相：A：0.1mmol/L甲酸水溶液；B：甲醇；梯度洗脱条件为：

所述的质谱条件为：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测(MRM)；

d)离子源温度：350℃；

e)定性离子对、定量离子对、碎裂电压和碰撞气能量为：

4.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，其特征在于，步骤三中所述的基质匹配标准溶液配置如下：

吸取标准贮备液，用空白样品提取液稀释成0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、200.0μg/L、300.0μg/L、500.0μg/L浓度系列基质匹配标准溶液。

5.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，其特征在于，步骤(3.1)中设定的相对丰度偏差如下：

。

6.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法，其特征在于，步骤(3.2)中所述的残留量计算公式如下：

其中，

X—试样中药物残留量的数值，单位为微克每千克(μg/kg)；

C_S—基质匹配标准溶液中药物浓度的数值，单位为微克每升(μg/L)；

A_x—试样溶液中药物的色谱峰面积；

A_S—基质匹配标准溶液中药物的色谱峰面积；

V—试样最终定容体积的数值，单位为毫升(mL)；

m—供试试样质量的数值，单位为克(g)。