[发明专利]功能性造血干细胞及其增殖的方法

权利要求书

1.一种基于三维微载体的功能性造血干细胞的体外扩增方法，其特征在于，所述方法包括将三维微载体添加至扩增培养基，培养人源非贴壁细胞，所述非贴壁细胞为人单核细胞，所述功能性造血干细胞为人巨核偏向造血干细胞。

2.根据权利要求1的扩增方法，其特征在于，所述人单核细胞来源为骨髓，外周血和脐带血之一。

3.根据权利要求1的扩增方法，其特征在于，所述人单核细胞采自血液病患者血液，优选的为骨髓衰竭性疾病患者，优选的为再生障碍性贫血患者。

4.根据权利要求1-3任一所述的扩增方法，其特征在于，所述方法中三维微载体在扩增培养基中的浓度为2.5-5mg/mL。

5.根据权利要求1-3任一所述的扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将骨髓、外周血、脐带血来源的单核细胞使用扩增培养基重悬至细胞浓度为5×10⁴-1×10⁶细胞；

(2)将三维微载体铺入24孔板内，并紫外照射20-30min；

(3)培养体系中细胞与三维微载体的比例为：(5×10⁴-1×10⁶个)细胞/(5-20mg)三维微载体，吸取100μL细胞悬液加入孔内，使三维微载体充分吸收细胞悬液，放入培养箱培养2小时后，补加1.9mL培养基至终体系2mL，搅动微载体使其分散开，均匀分布到培养基中，经培养后收集细胞。

6.根据权利要求5的扩增方法，其特征在于，步骤(3)培养条件为在37℃，5％CO₂恒温培养，培养7天。

7.根据权利要求5的扩增方法，其特征在于，步骤(1)所述扩增培养基为StemSpan^TMSFEMⅡ serum-free medium+10ng/mL hSCF+100ng/mL hTPO+1％P.S.。

8.一种功能性造血干细胞，其特征在于，根据权利要求1-6任一所述的方法培养获得。

9.一种药物制剂，其特征在于，所述制剂包括根据权利要求8所述的功能性造血干细胞和药学上可以接受的载体。

10.根据权利要求8所述的功能性造血干细胞或者根据权利要求9所述的药物制剂在制备治疗血液疾病制剂中的应用，其特征在于，所述血液疾病为骨髓衰竭性疾病。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述骨髓衰竭性疾病包括放化疗引起的骨髓性衰竭、再生障碍性贫血AA、范可尼贫血FA、原发免疫性血小板减少症(ITP)。

12.三维微载体在体外培养功能性造血干细胞中的应用，其特征在于，所述应用为将三维微载体添加到体外培养人单核细胞的培养基中，所述培养基中细胞数与三维微载体的加入量比例为：5×10⁴-1×10⁶细胞/5-20mg三维微载体，所述功能性造血干细胞为人巨核偏向造血干细胞。

13.根据权利要求12的应用，其特征在于，所述单核细胞来源为外周血、脐带血或骨髓。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述单核细胞采自血液病患者骨髓，优选的为骨髓衰竭性疾病，优选的为再生障碍性贫血。

15.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，使用三维微载体培养患者单核细胞的方法为：

(1)将单核细胞使用培养基重悬至细胞浓度为2×10⁶细胞/mL；

(2)将浓度为5mg/ml的三维微载体按照10mg/孔铺入24孔板内，并紫外照射20-30min；

(3)吸取100μL细胞悬液加入孔内，使三维微载体充分吸收细胞悬液，放入培养箱培养2小时后，补加1.9mL培养基至终体系2mL，搅动微载体使其分散开，均匀分布到培养基中，培养条件为在37℃，5％CO₂恒温培养，培养7天收集细胞。