[发明专利]HPLC分离测定替尼类关键中间体及其相关杂质的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及HPLC法分离测定替尼类关键中间体及其相关杂质的方法，采用以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，磷酸盐缓冲液和乙腈混合物为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，进入检测器进行检测。本发明可以有效地将替尼类关键中间体及其相关杂质分开，且该方法具有很高的灵敏度及分离度，重复性及耐用性好，操作简单，结果稳定可靠，对于实现替尼类药物质量控制具有极其重要的意义。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，涉及一种替尼类中间体的检测方法，尤其是一种分离测定替尼类关键中间体及其相关杂质的HPLC方法。

背景技术

目前，已经上市药物名称中带有“替尼”(tinib)的药物已将近30余种，替尼类治疗用途广泛，适应症主要集中于肿瘤，其次还涉及皮肤病、血液系统疾病、免疫系统疾病、肌肉骨骼和结缔组织疾病，是各大制药企业或者研究机构研发的热点之一。

巴瑞替尼(Baricitinib)是一种选择性JAK1和JAK2抑制剂，能抑制IL-6和IL-23等多种炎性细胞因子的细胞内信号传导，临床适用于治疗对一种或多种改善病情抗风湿药疗效不佳或不耐受的中重度活动性类风湿关节炎成年患者，可单独使用，也可与甲氨蝶呤或其他非生物改善病情抗风湿药联合使用。

目前巴瑞替尼质量标准在美国药典、日本药典、国家药品监督管理局进口药品注册标准等均有收载，但其关键中间体相关分析方法报道比较少。专利CN108976233A公开了一种巴瑞替尼杂质的分析方法，对原料药和3个杂质进行了检测，但是该分析方法未考虑原料带入的杂质和工艺过程中产生的杂质，远不能满足实际生产过程中质量控制的需求。

通常来说，一种药物杂质总含量应小于1.0％，单个杂质含量应小于0.1％，对于制备巴瑞替尼过程中产生的杂质或引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中均需要进行严格控制。(4-(1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)新戊酸甲酯为替尼类的关键中间体，该化合物的质量控制对高质量的替尼类原料药制备起到重要的作用，所以开发一种高效且精确的分析方法，对替尼类药物关键中间体进行质量分析，对后续制备高纯度的替尼类产品有着重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种HPLC法分离测定替尼类关键中间体及其相关杂质的方法；本发明的方法可以有效的将替尼关键中间体及其相关杂质分开，且该方法具有很高的灵敏度及分离度，重复性及耐用性良好，操作简单，结果稳定可靠。

为实现上述目的，本申请人经过大量的试验，确定了本发明的技术方案为：

HPLC法分离测定替尼类关键中间体及其相关杂质的方法，所述方法采用的色谱柱是以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用流动相A与流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述相关杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E中的一种或者多种，具体结构式如下所示：

所述流动相A为磷酸盐缓冲液与有机溶剂的混合溶剂，所述流动相B为有机溶剂。

所述替尼关键中间体为(4-(1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)新戊酸甲酯，是合成巴瑞替尼等替尼类的关键中间体，其化学式为C15H17N5O2，结构式如式(Ⅰ)如下，本发明中又简称“式Ⅰ化合物”或“替尼关键中间体”：

进一步，所述流动相A为磷酸盐缓冲液和乙腈混合物，所述磷酸盐缓冲液与乙腈体积比为90:10到95:5之间；

进一步，所述磷酸盐缓冲液与乙腈体积比优选95:5；

进一步，所述磷酸盐缓冲液用磷酸调节pH值至2.3-2.7；

作为一种优选，所述磷酸盐缓冲液用磷酸调节pH值到2.5；