[发明专利]β2-MG截短体的制备方法及应用

说明书

本申请公开了一种β2‑MG截短体的制备方法及应用。本发明提供的基于原核表达体系的β2‑MG截短体的制备方法，表达效率高，可溶性蛋白表达量大，便于分离纯化。制备获得的β2‑MG截截短体保留了与β2‑MG蛋白相当的活性高，且稳定性好。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及β2-MG截短体的制备方法及应用。

背景技术

β2-微球蛋白，简称β2-MG，是一种源自淋巴细胞、血小板及多行核白细胞分泌的含有血红素的小分子球蛋白，由99个氨基酸组成的单链线性，分子量为11.8KD。正常人血清中β2-MG的浓度处于0.5～2.0mg/L范围，肾脏是β2-MG排泄到体外的唯一脏器，当发生肾功能不全时，因β2-MG的排泄障碍致患者体内血清β2-MG浓度为正常人的60倍，β2-MG在组织中过度沉积容易诱发β2-MG相关淀粉样病变。研究发现血清中β2-MG的水平与肾β2-MG小球过滤率(GRF)呈显著负相关，通过血清或尿液中β2-MG浓度可以为临床肾功能测定、成活、重金属镉、某些病毒感染、自身免疫性疫病的临床诊断提供较早、可靠和灵敏的指标，同时也为性质肾小球或肾小管等部位提供依据。

现有技术中，在应用基因工程技术原核表达人β2-MG时，其表达的重组人β2-MG大多以包涵体形式为主，如文献中记载了朴文花等构建的rhβ2M表达载体，可溶性目的蛋白仅占总蛋白量的4％，经济效益不高。虽然包涵体蛋白可以通过变性、复性方法最终获得可溶性的rhβ2M，但是包涵体蛋白变性、复性过程复杂，同时大多数包涵体蛋白不能实现完全复性，有的复性率极低，影响了活性蛋白产量和稳定性。因此，本领域尚需开发一种基于基因工程技术的生产可溶性人β2-MG的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组β2-MG截短体制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种编码β2-MG截短体的多核苷酸序列。

本发明的另一目的在于提供与编码β2-MG截短体的多核苷酸序列适配的载体。

本发明的另一目的在于提供含有编码β2-MG截短体的多核苷酸序列的试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明第一方面，提供了一种编码β2-MG截短体的多核苷酸，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：

(i)具有如SEQ ID NO.3-5所示序列的多核苷酸；

(ii)具有与如SEQ ID NO.3-5所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和

(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。

本发明第二方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括本发明第一方面提供的多核苷酸。

在一些优选的方案中，所述表达载体包括表达His×6标签的多核苷酸序列，更优选地，所述表达载体中，所述的多核苷酸的3’端连接有表达His×6标签的多核苷酸序列。

在一些优选的方案中，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，更优选为pET-28a(+)。

本发明第三方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括本发明第二方面提供的表达载体；或者

所述宿主细胞的基因组中整合有如本发明第一方面提供的多核苷酸。

在一些优选的方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)。

在一些优选的方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。

本发明第四方面提供了一种制备β2-MG截短体的方法，所述方法包括步骤：培养本发明第三方面所述的宿主细胞，以表达出目的蛋白；和

分离所述目的蛋白，即得所述β2-MG截短体；