[发明专利]一种白介素-6的检测方法及试剂盒

说明书

本发明的目的在于提供一种白介素‑6的检测方法及试剂盒，其具有高灵敏度、宽线性范围，能够满足现有的检测需求，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：步骤1、将50μL待测样本、50μL生物素化抗体和50μL酶标记抗体加入至化学发光微孔板中混匀；所述生物素化抗体为生物素与白介素‑6单克隆抗体偶联得到的产物；所述酶标记抗体为辣根过氧化物与白介素‑6单克隆抗体偶联得到的产物；步骤2、进行孵育：在37℃的温度下，一起孵育10min；步骤3、进行清洗：将350μL清洗液加入到微孔中，清洗四次，将未结合在固相上的抗体和被测样本清除；步骤4、进行读数：加入化学发光底物A、化学发光底物B，酶催化底物发光，通过光电倍增器测量发光强度；步骤5、利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤4得到的发光强度对照所述发光强度标准曲线，计算得出待测样本中的白介素‑6含量。

技术领域

本发明属于白介素-6检测相关技术领域，具体涉及一种白介素-6的检测方法及试剂盒。

背景技术

对急诊感染常用的检测方法包括：血常规、胸部影像以及微生物学检查，但血常规检测不能客观地反映严重感染者的真实情况；胸片可能出现漏诊；胸部CT的敏感性和特异性虽然优于胸片，但不适用于危重患者，且不便随访；微生物学检查虽被视为“金标准”，但其耗时长，而且很多到达急诊室的患者都已接受了抗感染治疗，影响病原体的检出率。所以，急诊科迫切需要更为“理想”的生物标志物能在感染早期发生显著变化，不受非感染因素影响，以实现在紧急情况下的早诊早治；可鉴别诊断病原体类型，在复杂而连续变化的过程中，帮助评估感染的严重程度和预后；准确有效地指导抗菌药的使用，从而提高治疗成功率，降低死亡率，更有效地利用医疗资源。

为了顺应市场需求，近年来用血清标志物作为诊断标准以其快速、便捷、创伤小、费用低的特点越来越受关注。目前研究比较多的血清炎症标志物有降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)和白介素-6(interleukin-6，IL-6)。其中，白介素-6有如下临床价值：1)当感染和炎症发生后，白介素-6率先生成且水平迅速升高，可在2h达高峰，其升高水平与感染的严重程度相一致，并诱导降钙素原(PCT)和CRP分别在感染2h和6h后开始升高。2)白介素-6是急性感染早期诊断的灵敏指标，尤其可作为对患者感染早期的鉴别诊断指标，并对制定患儿治疗方案和改善预后具有重要的参考意义。3)白介素-6升高与疾病的严重程度呈正相关，增高幅度反应病情的严重程度。在危重患者中可持续长时间高水平的表达，可作为评估脓毒症和MODS患者严重程度和预后的敏感指标，并能更快反映抗生素治疗的效果。4)白介素-6鉴别感染与非感染的敏感性高于PCT和CRP，还可用来评价感染严重程度和评估预后，当白介素-61000pg/mL时预警重症感染患者预后不良，提示临床医师及时调整诊疗方案。因此近年来IL-6作为一种炎症标志物在临床应用上越来越广泛。

由于白介素-6在健康人群中的含量极低＜7pg/mL，现有的检测试剂盒无法满足该项目灵敏度的要求；同时脓毒症患者体内的白介素-6会出现＞5000pg/mL的现象，所以试剂盒需具备宽线性范围。因此当前亟需设计一种新型的白介素-6的检测方法及试剂盒来满足高灵敏度、宽线性范围的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白介素-6的检测方法及试剂盒，其具有高灵敏度、宽线性范围，能够满足现有的检测需求。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案。

一种白介素-6的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

步骤1、将50μL待测样本、50μL生物素化抗体和50μL酶标记抗体加入至化学发光微孔板中混匀；

所述生物素化抗体为生物素与白介素-6单克隆抗体偶联得到的产物；

所述酶标记抗体为辣根过氧化物与白介素-6单克隆抗体偶联得到的产物；

步骤2、进行孵育：在37℃的温度下，一起孵育10min；