[发明专利]一种Apaf1基因敲除HEK293细胞系及构建方法和应用在审
| 申请号： | 202211589146.5 | 申请日： | 2022-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN115806939A | 公开（公告）日： | 2023-03-17 |
| 发明（设计）人： | 张俊河;王天云;肖云喜;牛敬媛;徐红彦;马静;贾岩龙;王小引 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/113 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 453003 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 apaf1 基因 hek293 细胞系 构建 方法 应用 | ||
1.一种Apaf1基因敲除HEK293细胞系，其特征在于：对HEK293细胞中的Apaf1基因进行敲除，得到Apaf1基因敲除的HEK293细胞系。
2.根据权利要求1所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系，其特征在于：所述敲除为利用CRISPR/Cas9技术实现。
3.根据权利要求1所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系，其特征在于：所述HEK293细胞为HEK293E细胞。
4.一种如权利要求1所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系构建方法，其特征在于：包括以下步骤：根据人Apaf1基因序列设计sgRNA，将其分别插入到表达载体中构建sgRNA表达载体；sgRNA表达载体转染HEK293细胞，经嘌呤霉素筛选、细胞单克隆化处理、鉴定后获得敲除Apaf1基因的HEK293细胞系。
5.根据权利要求4所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系构建方法，其特征在于：所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO1～3所示。
6.根据权利要求4所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系构建方法，其特征在于：所述sgRNA的敲除靶点位于Apaf1基因第三外显子上；所述Apaf1基因第三外显子的核苷酸序列如SEQ ID NO5所示。
7.根据权利要求4所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系构建方法，其特征在于：所述嘌呤霉素的浓度为1.0～1.5μg/ml。
8.一种如权利要求1所述的Apaf1基因敲除HEK293细胞系在重组蛋白生产中的应用。
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