[发明专利]融合蛋白合成的方法和产品

权利要求书

1.生产融合蛋白的方法，所述方法包括：

a)将第一蛋白质与第二蛋白质在能够在所述蛋白质之间形成异肽键的条件下接触，其中所述第一蛋白质和所述第二蛋白质每种包括肽连接体，其中所述肽连接体是肽连接体对，其反应以形成连接所述第一蛋白质至所述第二蛋白质以形成连接的蛋白质的异肽键；和

b)将来自(a)的所述连接的蛋白质与第三蛋白质在能够在所述第三蛋白质和所述连接的蛋白质之间形成异肽键的条件下接触，其中所述第三蛋白质包括与来自(a)的所述连接的蛋白质中的进一步肽连接体反应的肽连接体，并且其中所述肽连接体是肽连接体对，其反应以形成连接所述第三蛋白质至所述连接的蛋白质以形成融合蛋白的异肽键，

其中在(a)中使用的所述肽连接体对正交于在(b)中使用的所述肽连接体对。

2.权利要求1所述的方法，其为生产融合蛋白的方法，所述方法包括：

a)提供包括第一肽连接体的第一蛋白质；

b)将所述第一蛋白质与第二蛋白质在能够使得所述第一肽连接体和第二肽连接体形成异肽键的条件下接触，从而连接所述第一蛋白质和第二蛋白质，其中所述第二蛋白质包括所述第二肽连接体和第三肽连接体；和

c)将所述连接的第一蛋白质和第二蛋白质与第三蛋白质在能够使得所述第三肽连接体和第四肽连接体形成异肽键的条件下接触，从而连接所述第二蛋白质和第三蛋白质以产生融合蛋白，其中所述第三蛋白质包括所述第四肽连接体，

其中所述第一肽连接体和第二肽连接体是肽连接体对，其正交于由所述第三肽连接体和第四肽连接体组成的肽连接体对。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述方法进一步包括延伸所述融合蛋白的步骤，其中待与所述融合蛋白连接的新蛋白质包括形成肽连接体对的一部分的肽连接体，所述肽连接体对正交于用于形成所述融合蛋白中的先前异肽键的肽连接体对，其中所述新蛋白质中的肽连接体能够与所述融合蛋白的蛋白质中的肽连接体形成异肽键，所述方法包括在能够使所述新蛋白质与所述融合蛋白中的肽连接体形成异肽键的条件下使所述新蛋白质与所述融合蛋白接触。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白具有分支、线性或环状结构。

5.权利要求4所述的方法，其中所述融合蛋白是可环化的。

6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述肽连接体之间的所述异肽键形成是自发的。

7.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述肽连接体之间的所述异肽键形成由添加至反应的组分诱导。

8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述肽连接体对的每个衍生自异肽蛋白。

9.权利要求8所述的方法，其中每个肽连接体对衍生自不同的异肽蛋白。

10.权利要求8或9所述的方法，其中所述异肽蛋白包括如在SEQ ID NO:21、23、25、27、29或31的任一个中陈述的氨基酸序列或与如在SEQ ID NO:21、23、25、27、29或31的任一个中陈述的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的蛋白质。

11.权利要求7-10中任一项所述的方法，其中诱导所述肽连接体之间的异肽键形成的组分是肽连接酶，优选地其中所述肽连接酶包括诱导所述肽连接体之间的异肽键形成的谷氨酸或天冬氨酸残基。

12.权利要求11所述的方法，其中所述肽连接酶衍生自异肽蛋白，优选地其中所述肽连接酶衍生自与诱导异肽键形成的肽连接体对相同的异肽蛋白。

13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述肽连接体中的一个或多个包括封闭基团。

14.权利要求13所述的方法，其中所述封闭基团阻止关联肽连接体对之间的异肽键形成。