[发明专利]一种治疗用卡介苗菌体的分散、冻干方法及原液、半成品、成品

说明书

本发明属于疫苗制备领域，具体公开了一种治疗用卡介苗菌体的分散、冻干方法及原液、半成品、成品，通过将15g～20g菌体分散到125g～167g冻干保护剂中，获得1单位重量菌悬液浓度为120mg/mL～140mg/mL的治疗用卡介苗原液；采用冻干保护剂将治疗用卡介苗原液分散1.8～2.5倍，混合均匀，得1单位重量治疗用卡介苗半成品；1单位重量治疗用卡介苗半成品中卡介菌浓度为48～72mg/mL。本发明制备的治疗用卡介苗冻干产品的质量远高于《中国药典》三部要求的标准，经试验证明，本发明涉及的治疗用卡介苗活菌数也大大提高，具有更高的初始活菌数和热稳定性，并由此有可能降低灌注剂量，缓解该类制品短缺问题。

技术领域

本发明属于疫苗制备领域，特别涉及一种治疗用卡介苗菌体的分散、冻干方法及原液、半成品、成品。

背景技术

治疗用卡介苗是采用卡介菌经培养收集菌体，制备高浓度卡介菌菌悬液，加入稳定剂冻干制成的制剂。目前全球有5款产品已上市，而因为监管、成本和设备等因素，北美和欧洲主要供应商赛诺菲于2017年宣布正式退出该市场，导致全球治疗用BCG处于短缺状态。当前冻干制品稳定性最高可以保持18个月，实践运用中18个月效期仍不能满足实际市场需求，产品的货架期较短，因此生产高质量及稳定性好的治疗用卡介苗是一项具有挑战的工作。

目前已上市的必赛吉治疗用BCG用卡介菌经培养后收集菌体，加入稳定剂分装至安瓿中冻干制成的免疫治疗剂，采用冻干保护剂为蔗糖、明胶、谷氨酸钠、氯化钾，冻干生产工艺与预防结核病用卡介苗相同(《中国药典》现行版)为行业内公认，而治疗用卡介苗制品质量指标之一卡介菌活菌数及活菌数的稳定性是影响免疫效果的关键因素，每瓶含卡介菌60mg，每1mg卡介菌含活菌数为1.0×10⁶CFU，活菌数的质量仅能满足《中国药典》现行版三部要求“不低于1.0×10⁶CFU/mg”的最低标准；且内包材采用安瓿，一方面因包材直立时稳定性差，冻干时半成品分装后进出冻干机无法做到自动进出，只能采用手动进出冻干机，不符合自动化生产要求，为产品安全带来风险，另一方面与国际上该类产品采用的主流包材西林瓶存在差距。

目前，现有技术中对卡介菌的研究中，多针对卡介菌的冷冻和冷冻干燥技术研究中保护剂处方研究和冻干工艺研究。例如公开号为CN106754376A的专利提出了涉及一种微生物低温保存保护剂，及其制备方法和用途；其中微生物低温保存保护剂的成分为：还原性糖、甘油、非离子型表面活性剂、钾盐、谷氨酸盐和水；同时建立了卡介菌低温长期保存的技术方法，为深入开展卡介菌的相关研究提供了技术支撑；但治疗用卡介苗剂型基本都是采用注射用冻干剂型，液体冷冻稳定性差，不能满足临床使用要求。公开号为CN1218750C的专利公开了治疗用卡介苗的保护剂和冻干工艺，制备联合疫苗具有强免疫原性；公布重组hIFN-α-2b-BCG冻干保护剂处方：10％蔗糖、1％明胶、1％谷氨酸钠、1％氯化钾，冻干制剂活菌率高，满足生物免疫治疗标准，生物学特性和质粒具有稳定性。公开号为CN111588859A的专利提出了一种冻干保护剂及其应用和冻干苗及其制备方法，冻干保护剂各成分配制浓度为：蔗糖10％、右旋糖酐0.5～2.0％、谷氨酸钠1％、KCL1％，或者是蔗糖10％、右旋糖酐1％、海藻糖1～5％、谷氨酸钠1％、KCL1％，配制冻干保护剂的溶剂为注射用水，用10％氢氧化钠溶液调节冻干保护剂的pH值为7.3～7.5。但采用该专利方法制备的治疗用稳定性研究结果显示有效质量的时间为3个月，远远低于上市品18个月的最长效期。菌体采用保护剂分散后，半成品菌体浓度为120mg/mL。综上可以看出，菌体在保护剂中的分散方式的研究未见涉及。