[发明专利]一种鞣花酸在制备促进山羊繁殖性状药物中的应用

说明书

本发明公开了一种鞣花酸在制备促进山羊繁殖性状药物中的应用，通过体外培养贵州黑山羊卵巢颗粒细胞，研究不同EA浓度对卵巢颗粒细胞增殖、迁移、抗氧化活性、繁殖标记基因、免疫基因和凋亡蛋白的影响，结果筛选出150μmol/L的EA是促进颗粒细胞中繁殖相关基因表达的最适浓度，在颗粒细胞中添加150μmol/L的EA能极显著抑制凋亡蛋白caspase3、caspase9的表达，调低bax/bcl2的比例，从而提高抗炎因子IL‑10、SOD2的表达量，抑制促炎因子IL‑8的表达，降低细胞生长过程中产生的ROS含量，抵抗细胞损伤，对黑山羊卵巢颗粒细胞有抗凋亡、抗氧化损伤、促繁殖的作用。

技术领域

本发明涉及中药材种植领域，具体涉及一种鞣花酸在制备促进山羊繁殖性状药物中的应用。

背景技术

卵泡发育是雌性哺乳动物生长发育的重要过程，改善卵泡发育情况对于提高哺乳动物的繁殖效率具有重要意义。鞣花酸(Ellagic Acid，EA)被证明具有抗氧化、抗炎等生物活性。

抗氧化剂(Antioxidants)是能清除自由基、超氧自由基和羟基自由基的一类化学物质，通过各种分子途径防止或延缓机体氧化导致的各种损伤和疾病。机体内细胞代谢会产生一系列氧化物，例如自由基、活性氧(ROS)、过氧化氢(H₂O₂)等，由于这些氧化物非常活泼，会攻击机体内生物大分子，造成脂质的过氧化反应、DNA的氧化损伤及蛋白质的氧化变性^[1]。鞣花酸(Ellagic Acid，EA)，在多种坚果、植物(尤其是五倍子)中含量丰富，是一种天然的植物多酚抗氧化物^[2]。在实际应用中，EA已用于冷冻精子的保护^[3]，能减少自由基带来的细胞DNA、RNA的损伤^[4]；Jin等^[5]发现在日粮中添加EA饲喂仔猪，EA能通过改善微生物相关的肠道淋巴细胞失衡来防止肠道损伤调节肠道菌群，改善仔猪健康状况。在分子层面上，EA能抑制凋亡基因caspase-3、caspase-8、caspase-9及炎症因子NF-kappa B(p65)和p-IK-Bα的表达，在缺氧缺血性(HI)脑损伤中发挥神经保护作用^[6]。目前，大多数研究已证实鞣花酸的抗氧化作用，但其对动物繁殖相关的研究甚少。

贵州黑山羊是中国贵州珍贵的地方种质资源，改善其繁殖性能提高该品种的经济价值和发展潜力。卵泡是衡量雌性哺乳动物繁殖性能的重要指标，是卵巢的基本功能单位^[7]，在卵泡的发生与发育过程中，卵巢颗粒细胞(granulosa cell，GCs)扮演着重要角色，其生理状态与卵巢功能直接相关，通过调节细胞增殖、分化、周期和凋亡来控制卵泡生长、发育和闭锁^[8]；通过内分泌或和旁分泌分泌相关激素，维持卵母细胞生长发育所需微环境稳态^[9]。卵巢颗粒细胞闭锁、肥大或退化会导致代谢功能障碍或增殖异常^[10]，不能为卵母细胞提供营养和生长因子，使卵泡不能发育成显性卵泡，导致排卵功能障碍、多囊卵巢综合征(PCOS)发生率大大升高。同时，卵巢颗粒细胞还是从分子层面研究雌性动物生殖调控机制的细胞模型^[11]。此外研究发现，骨形态发生蛋白15(BMP15)和生长分化因子9(GDF9)参与卵母细胞发育和排卵的所有阶段^[12]，BMP15通过促进颗粒细胞增殖促进卵泡细胞的发育，GDF9促进原始卵泡发育成次级卵泡，在卵泡发育的早期阶段响应生殖激素^[13]；骨形态发生蛋白受体1B(BMPR1B)^[14]是绵羊高繁殖力的主效基因，控制排卵率和产仔数；卵泡刺激素β亚基(FSHβ)是卵巢发育和卵泡生长过程中的关键调控因子^[15]，能决定FSH和LH激素产生的速度，从而调节卵泡发育。因此，BMP15、GDF9、BMPR1B和FSHβ常被用作为动物繁殖性状的指标基因。