[发明专利]一种鉴定二十二碳五烯酸的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定二十二碳五烯酸的方法，其包括将非极性溶剂提取的活性成分通过高效液相色谱分离非极性相中的物质，然后将经过高效液相色谱分离的物质再进行LC‑MS/MS分析；高效液相色谱的流动相：流动相A包括乙腈、甲醇和水，流动相B包括乙腈和异丙醇。采用本发明的方法结果准确性高，方法简单，操作简便，可明显提高检测质量，并提高检测效果的准确性。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，具体而言，涉及一种鉴定二十二碳五烯酸的方法。

背景技术

慢性便秘(CC)是一种常见的多因素疾病，其特征是排便减少、大便硬和大便过度紧张。一些慢性便秘患者可以治愈，然而大约三分之一的慢性转移性功能性便秘患者(FC)对治疗没有反应并反复发作，这种医学上难治性慢运输型便秘被认为是结肠切除术的并发症(STC)，而这种病又称为对常规药物无效的顽固性功能性便秘(IFC)。到目前为止，已经确定了与难治性慢运输型便秘相关的几个因素，特别是，最近的全基因组分析和粪便移植表明，肠道微生物可能是影响肠道转运和慢性便秘表型的重要因素。

人体肠道中存在的数量庞大的微生物，这群微生物依靠人体的肠道生活，同时帮助人体完成多种生理生化功能。肠道微生物不仅在膳食和宿主之间起到了重要的桥梁作用，其本身以及代谢产物也能调节人体健康，因此肠道微生物与人体健康密切相关。研究发现一种细菌分离物PIB(蠕动抑制细菌)，它可以通过产生长链不饱和脂肪酸二十二碳五烯酸(DPA)来抑制结肠收缩，而DPA降低的突变PIB不能抑制结肠功能和诱导便秘，因此可以通过检测PIB中的DPA含量来判断患者是否是由细菌感染引起的IFC。为此，通过液相色谱的方法来检测用于鉴定PIB中的DPA，这对于开发该疾病的诊断和治疗方法至关重要。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴定二十二碳五烯酸的方法，该检测方法简单、操作简便，可明显提高检测质量，并提高检测效果的准确性。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种鉴定二十二碳五烯酸的方法，其包括采用非极性溶剂从待测样品中提取活性成分，然后通过高效液相色谱分离非极性相中的物质，将经过高效液相色谱分离的物质再进行LC-MS/MS分析；

上述高效液相色谱的流动相：流动相A包括乙腈、甲醇和水，流动相B包括乙腈和异丙醇。

在一些实施方式中，流动相A中乙腈、甲醇和水的体积比为(30％-35％)、(33％-36％)和(35-40％)；流动相B中乙腈和异丙醇的体积比例分别(45％-55％)、(45％-55％)。

在一些实施方式中，流动相A中还包括10mM甲酸铵。

在一些实施方式中，非极性溶剂包括二氯甲烷。

在一些实施方式中，梯度洗脱程序为：

0-1min：流动相A为85％，流动相B为15％；

1-5min：流动相A从85％变化为50％，流动相B从15％变化为50％；

5-15min：流动相A从50％变化为5％，流动相B从50％变化为95％；

15-20min：流动相A为5％，流动相B为95％。

在一些实施方式中，高效液相色谱的色谱柱为十八烷基键合多孔硅胶。

在一些实施方式中，高效液相色谱中待测样品的流速为0.5-1.5mL/min。

在一些实施方式中，高效液相色谱的色谱柱温为：20-30℃。

在一些实施方式中，高效液相色谱的检测波长为210-220nm。

在一些实施方式中，LC-MS/MS分析中液相色谱的条件为：