[发明专利]一种用于培养MDCK细胞及扩增病毒的组合培养基及其应用

说明书

本发明提出了一种用于培养MDCK细胞及扩增病毒的组合培养基及其应用，所述组合培养基包括：用于贴壁培养MDCK细胞的培养基和病毒维持液。利用本发明的用于贴壁培养MDCK细胞的培养基可以更快地完成对MDCK细胞的驯化适应，支持MDCK细胞在固定床生物反应器内高密度贴壁培养，细胞活率高，结团率低，能够在多项指标上获得比血清培养更优异的表现，同时提高被病毒感染能力，有助于病毒感染。感染细胞后的病毒可以在本发明的病毒维持液中有效扩增，提高病毒效价，从而更好地应用于疫苗病毒的扩增生产，提高生产效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。具体地，本发明涉及一种用于培养MDCK细胞及扩增病毒的组合培养基及其应用。

背景技术

病毒（Biological virus）是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸（DNA或RNA）、必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物，同时，病毒也是常见的病原。由于病毒没有细胞结构，仅由遗传物质核酸和蛋白质外壳组成。因此，其一切生命活动必须依赖宿主细胞，即病毒的扩增必须依赖于宿主细胞。

犬肾(Madin-Darby canine kidney cells，MDCK)细胞由Madin和Darby分离培育建立，具有培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等优点，可以用于扩增病毒。

然而，目前利用MDCK细胞培养病毒的培养基和方法仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效地利用低血清MDCK细胞培养基贴壁培养MDCK细胞并结合病毒维持液以扩增病毒的方法。

本申请是基于发明人的下列发现而完成的：

传统的MDCK细胞培养方式是在含有10%左右血清的MEM培养基中贴壁生长，血清能够为细胞的生长增殖提供所需的激素、生长因子、转移蛋白和其它营养物质。但是血清的成分复杂，且不同产地、批次之间存在着质量差异，因而给细胞大规模培养工艺造成了诸多不利影响。另外，利用含血清培养基培养细胞获得产物的过程中，血清成为分离和纯化的主要障碍，残留的血清进入人体内会不可避免地引发不必要的免疫反应。

有鉴于此，发明人结合之前在细胞培养领域积累的丰富经验，进行了大量的筛选和优化工作，在减少血清用量的前提下，意外获得了一种添加在MEM培养基中的添加剂，利用添加有该添加剂的MEM培养基可以在低血清条件下更快地完成对MDCK细胞的驯化适应，支持MDCK细胞在固定床生物反应器内高密度贴壁培养，细胞活率高，结团率低，能够在多项指标上获得优异表现，同时提高了被病毒感染能力，有助于病毒感染。进一步地，为了能够使得病毒感染细胞后更好地扩增，发明人经过大量实验筛选和优化获得了一种病毒维持液，感染细胞后的病毒可以在该病毒维持液中有效扩增，提高病毒效价，从而更好地应用于疫苗病毒的扩增生产，提高生产效率。