[发明专利]一种大肠杆菌裂解澄清试剂盒及大肠杆菌的裂解方法

说明书

本公开涉及分子生物学技术领域，涉及一种大肠杆菌裂解澄清试剂盒及大肠杆菌的裂解方法，其中，方法包括：获取待裂解的大肠杆菌培养液，并对所述培养液进行离心处理，收集含有菌体的沉淀；使用裂解液对所述沉淀进行裂解得到湿菌，在湿菌中加入溶菌酶溶液进行裂解，直至所述沉淀中的菌体完全裂解；向裂解后的湿菌中添加全能核酸酶，以去除所述湿菌中的DNA/RNA，得蛋白混合物；对所述蛋白混合物进行蛋白提取，获得大肠杆菌的裂解产物蛋白质，本申请采用大肠杆菌裂解澄清试剂盒可在实验室水平替代超声破碎法裂解澄清大肠杆菌；在生产规模，作为高压匀浆重要辅助手段，降低菌液粘稠度，提高蛋白收率。

技术领域

本公开涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种大肠杆菌裂解澄清试剂盒及大肠杆菌的裂解方法。

背景技术

转基因技术中，可以把控制合成某种蛋白质的基因经过改造让其变成可表达的基因，再注射到大肠杆菌内，因为大肠杆菌本身就有氨基酸和核糖体，故可通过大肠杆菌制造所需要的蛋白质，如制造抗体。

目前，蛋白质制作完成后，需要对大肠杆菌进行裂解澄清，进而将大肠杆菌中的蛋白质提取出来；如期刊：华夏医学，第29卷第4期，2016.6月刊，公开了渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白；其公开了“目前，一般采用透压休克破碎法或者超声破碎法进行提取，并与渗透压休克法从大肠杆菌中提取的蛋白质进行了比较。且采用透压休克破碎法提取的蛋白质的方法更为高效。”

但是，采用透压休克破碎法，提取蛋白质的时间较长，另外所需设备的体积较大，相对应的，其蛋白质提取成本高，如上述现有论文中提汲，超声破碎法中，超声破碎会发大量的热，如果温度过高会使蛋白变性，导致蛋白损失。

需要说明的是，在上述背景技术部分公开的信息仅用于加强对本公开的背景的理解，因此可以包括不构成对本领域普通技术人员已知的现有技术的信息。

发明内容

本公开的目的在于提供一种大肠杆菌裂解澄清试剂盒及大肠杆菌的裂解方法，进而至少在一定程度上克服由于相关技术的限制和缺陷而导致的渗透压休克破碎法提取蛋白质的成本高以及超声破碎法提取导致蛋白损失的情况。

本公开的其他特性和优点将通过下面的详细描述变得显然，或部分地通过本公开的实践而习得。

根据本公开的第一方面，提供了一种大肠杆菌裂解澄清试剂盒，其配方包括：

全能核酸酶、溶菌酶、裂解液、稀释液；其中，

所述裂解液的组份按质量计包括：1.514g Tris-HCl、0.048g EDTA、0.029gNaCl、0.048g MgCl2、0.25ml脱氧胆酸钠、200ml超纯水溶解；

所述稀释液的组份按质量计包括：1.514g Tris-HCl，200ml超纯水溶解。

进一步的，所述全能核酸酶的制备方法为：

获取含有目标全能核酸酶基因的质粒；

对所述质粒进行扩增，得到菌体；

破碎所述菌体，去除沉淀以获取上层蛋白；

对所述上层蛋白进行层析处理，得所述全能核酸酶。

进一步的，步骤对所述质粒进行扩增，得到菌体包括：

将质粒置于大肠杆菌中；

在培养液中不断溶氧并培养大肠杆菌，以提高大肠杆菌的生长密度；其中，溶氧为以氧载体的形式进行；其中，所述氧载体为5％的正十二烷。

进一步的，所述裂解液的pH值为7.4～8.5；所述稀释液的pH值为7.4～8.5；

所述溶菌酶的规格为10mg/5支；所述全能核酸酶的规格为12.5KU。