[发明专利]重组人粒细胞集落刺激因子的高压定点聚乙二醇修饰方法

权利要求书

1.一种重组人粒细胞集落刺激因子的高压定点聚乙二醇修饰方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)对重组人粒细胞集落刺激因子和马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂的混合溶液在压力下进行反应；

(2)对步骤(1)处理后的产物进行分离纯化并进行结构和活性验证，得到重组人粒细胞集落刺激因子马来酰亚胺聚乙二醇修饰产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述重组人粒细胞集落刺激因子和马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂的混合溶液在压力下进行反应通过以下步骤：

a.将所述重组人粒细胞集落刺激因子和马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂按照一定的修饰摩尔比加入至pH值6.5-8.0的缓冲溶液混合；

b.将所述重组人粒细胞集落刺激因子和马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂的混合溶液在压力下进行反应。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤a所述重组人粒细胞集落刺激因子与马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂的摩尔比为1:1-1:10；所述混合溶液是重组人粒细胞集落刺激因子与马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂加入至缓冲溶液中得到的溶液，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液或Tris-HCl缓冲溶液。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为pH 6.5的20mM磷酸盐缓冲液、pH 7.0的20mM磷酸盐缓冲液、pH 7.5的20mM磷酸盐缓冲液、pH 7.5的20mM Tris-HCl缓冲溶液或pH 8.0的20mM Tris-HCl缓冲溶液中的任意一种。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤b所述压力反应是将所述重组人粒细胞集落刺激因子和马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂混合溶液直接通过高压处理，高压处理条件为压力0.1-600Mpa，作用时间6-24h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述分离纯化选用SP FF阳离子层析或Superdex 200凝胶过滤层析；所述结构验证选用荧光光谱分析和圆二色光谱分析；所述活性验证通过NFS-60细胞增值活性分析细胞活性以及使用SD大鼠进行体内药代动力学分析。