[发明专利]一种牛源噬菌体单链抗体库及其构建

说明书

本发明涉及一种牛源噬菌体单链抗体库，该抗体库是由噬菌体表面展示牛源单链抗体构建而成，所述的单链抗体是由重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因通过一个柔性Linker拼接构建而成。本发明还涉及了上述牛源噬菌体单链抗体库的构建方法。本发明构建的牛源噬菌体单链抗体库解决了牛源性抗体的制备问题，可以根据需要改造抗体的性能，并能通过体外免疫实现在体外制备各种抗体，为筛选特异性抗体研究提供了新的思路。

技术领域

本发明属于动物分子生物学领域，涉及一种牛源噬菌体单链抗体库及其构建。

背景技术

研究证明，单链抗体(ScFv)是应用前景最广泛的基因工程抗体，将抗体的重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因通过一个柔性小肽拼接构建而成，与完整的单链抗体相比，ScFv不仅完全保留了与特定抗原的高亲和力，而且其分子量只有完整抗体1/6，分子量小，组织穿透能力强，无Fc段，免疫原性产生的副作用小，易于构建。且在疾病的预防、诊断和治疗中均具有重要的应用。

利用噬菌体展示技术构建牛源性单链抗体库，为筛选高亲和力的ScFv奠定了基础。ScFv不仅克服了完整抗体分子不易达到靶细胞、清除慢、易引起超敏反应的弱点，还有利于分子操作，可以与药物和毒素连接，形成免疫药物或者免疫毒素等，利用抗原与抗体特异性结合的特点，定位于靶细胞，对靶细胞进行特异性免疫杀伤，为靶向治疗提供新的途径。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种牛源噬菌体单链抗体库，克服目前尚无利用噬菌体展示技术构建牛源性单链抗体库的问题。

本发明的第二目的是提供上述牛源噬菌体单链抗体库的构建方法。

本发明通过以下技术方案来实现：

一、一种牛源噬菌体单链抗体库，该抗体库是由噬菌体表面展示牛源单链抗体构建而成，所述的单链抗体是由重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因通过一个柔性Linker拼接构建而成。

进一步的，所述的牛源噬菌体单链抗体库的库容量约为2.7×10¹³pfu/mL。

二、一种根据上述的牛源噬菌体单链抗体库的构建方法，该方法包括以下步骤：

(1)设计牛源性抗体重链可变区引物和轻链可变区引物，扩增出重链可变区片段和轻链可变区片段；

(2)设计带有柔性Linker的引物序列，通过扩增将重链可变区片段和轻链可变区片段与Linker连接，再通过重叠PCR技术，扩增得到单链抗体ScFv；

(3)设计带有酶切位点的引物，通过扩增对单链抗体ScFv增加酶切位点；

(4)将带有酶切位点的ScFv片段进行双酶切，连接，转化，酶切鉴定，构建噬菌体单链抗体库。

进一步的，步骤(1)中牛源性抗体重链可变区引物序列如下：

进一步的，步骤(1)中牛源性抗体轻链可变区引物序列如下：

进一步的，步骤(2)中带有柔性Linker的引物序列如下：

进一步的，步骤(3)中带有酶切位点的引物序列如下：

进一步的，所述的引物为简并引物。

采用上述技术方案的积极效果：本发明构建的牛源噬菌体单链抗体库解决了牛源性抗体的制备问题，可以根据需要改造抗体的性能，并能通过体外免疫实现在体外制备各种抗体，为筛选特异性抗体研究提供了新的思路。

附图说明