[发明专利]一种基于Image J图像分析的猪肌纤维直径测定方法

说明书

本发明涉及动物肌纤维直径测定技术领域，尤其涉及一种基于Image J图像分析的猪肌纤维直径测定方法。该方法包括：S1、猪骨骼肌肌纤维图像采集；(1)猪骨骼肌肌肉样品采集；(2)骨骼肌石蜡切片制备；(3)石蜡切片的HE染色；(4)图像采集；S2、利用Image J软件对S1的图像进行定量分析处理；S3、肌纤维直径的计算。通过对制备的骨骼肌石蜡切片经HE染色后拍照，利用Image J对照片进行处理分析，获得的猪骨骼肌肌纤维直径更好的方法，减少了HE染色后肌纤维形态改变和肌纤维类型对肌纤维直径结果的影响，避免了现有肌纤维测量耗时长、测定效率低及人为误差的情况，可实现快速批量测定，操作简单。

技术领域

本发明涉及动物肌纤维直径测定技术领域，尤其涉及一种基于Image J图像分析的猪肌纤维直径测定方法。

背景技术

随着人均收入水平提高以及大健康时代健康消费理念的普及，消费者对安全、优质和特色猪肉产品更加偏爱。肌纤维是肌肉的基本组成单位，肌纤维的粗细是影响猪肉食用品质和加工品质的重要因素。肌纤维根据不同的分类方法可分为多种类型，不同类型的肌纤维在不同品种间或同一品种的不同部位间含量均存在差异。另外，不同类型肌纤维的直径也不同，例如根据肌纤维收缩速度划分的快肌纤维和慢肌纤维，快肌纤维的直径较大。

目前，肌纤维直径的测定方法主要为，制备骨骼肌样本石蜡切片，HE染色后通过测微尺或测量软件随机测量每根肌纤维的长轴和短轴，计算长轴和短轴的几何平均值或是计算长轴、短轴和0.7的乘积，从而换算成每根肌纤维的直径，最终通过测量多根肌纤维后取平均值获得肌纤维直径值。在生理状态下，肌纤维横切面接近圆形，但经组织学处理后肌纤维将变成多边形或椭圆形，这将造成肌纤维直径测定不准确，且依次测量大数量的肌纤维耗时时间长，测定效率低。另外，也见通过10％硝酸浸泡肌肉组织，将其分散成单根肌纤维，在显微镜下通过目镜测微尺测量每根肌纤维的直径，而后取平均值获得肌纤维直径的方法。但该方法随机挑选单根肌纤维依次测量，可能会因测量人员的不同而出现误差，也可能忽略肌肉中较细且占比较低的肌纤维类型，且同样需要测量大数量的肌纤维以降低误差，耗时时间长，测定效率低。肌纤维直径的测量技术一定程度上制约了肌纤维直径的研究，限制了猪肉质品质改良的进程。

发明内容

本发明提供了一种基于Image J图像分析的猪肌纤维直径测定方法，通过对制备的骨骼肌石蜡切片经HE染色后拍照，利用Image J对照片进行处理分析，获得的猪骨骼肌肌纤维直径更好的方法，减少了HE染色后肌纤维形态改变和肌纤维类型对肌纤维直径结果的影响，避免了现有肌纤维测量耗时长、测定效率低及人为误差的情况，可实现快速批量测定，操作简单，解决了现有技术中存在的问题。

本发明所采用的技术方案是：

一种基于Image J图像分析的猪肌纤维直径测定方法，包括如下操作步骤：

S1、猪骨骼肌肌纤维图像采集

(1)猪骨骼肌肌肉样品采集；

(2)骨骼肌石蜡切片制备；

(3)石蜡切片的HE染色；

(4)图像采集；

S2、利用Image J软件对S1的图像进行定量分析处理；

S3、肌纤维直径的计算

肌纤维的横切面积S1为选定区域内肌纤维总面积S0除以选定范围内肌纤维的数目N，即S1＝S0/N；

计算多个选定范围(n)中肌纤维的平均直径d1，d2，d3……dn；得到该个体的平均肌纤维直径d＝(d1+d2+d3+……+dn)/n。

进一步地，步骤S3进行手动选择肌纤维测定区域及肌纤维测定区域内肌纤维计数，保证多个测定区域内肌纤维直径的总根数大于150根。