[发明专利]一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒及应用

说明书

本发明涉及一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的方法，使用基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒，所述试剂盒的成分由裂解结合液、洗涤液、洗脱液和磁珠组成，所述裂解结合液由SDS或CTAB、盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris‑HCl、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30和异丙醇中至少5种成分组成，所述洗涤液液为乙醇水溶液，所述洗脱液为Tris‑HCl和EDTA。本发明的方法操作步骤少，简单快速，无需对样本进行预处理，10分钟内即可快速完成提取操作，大大缩短了DNA提取时间；不使用氯仿、苯酚等有机溶剂，可大幅降低对实验人员的身体伤害；兼容各物种口腔拭子样本；可有效减少提取过程中核酸的损失，大大增加提取效率。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种利用磁珠法快速提取口腔拭子DNA的试剂盒及应用。

背景技术

DNA(Deoxyribonucleicacid)，又称脱氧核糖核酸，是绝大多数生物的遗传物质，决定了生物的基本特征，是分子生物学最重要的研究内容之一。快速提取高质量DNA对于开展分子生物学研究和分子诊断工作有重要意义。

目前提取DNA的方法主要有酚/氯仿法、磁珠法、过柱法等。酚/氯仿法的试剂对人体和环境均有毒害作用，同时操作较为复杂，无法配备高通量自动化提取设备；过柱法由于亲和柱的亲和力问题，只能吸附大的DNA片段。磁珠法无需氯仿等有害试剂，同时可高效吸附DNA片段，适配高通量自动化提取设备，成为核酸提取的热点研究技术。近年来公布了很多磁珠法DNA提取方法的专利，但大部分试剂盒提取时间较长，例如申请号CN202110722206.5、CN202011536024.0、CN202110249828.0等专利，提取时间均在30-60min。

发明内容

本发明的一个目的是为了提供一种基于磁珠的快速提取口腔拭子DNA的试剂盒，所述试剂盒无需有害试剂，省时省力，节约成本，且提取的基因组DNA纯度高。

本发明提供的基于磁珠的快速提取口腔拭子DNA的试剂盒包括裂解结合液、洗涤液、洗脱液和磁珠，所述裂解结合液由SDS、CTAB、盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris-HCl、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30和异丙醇中的至少5种成分组成，所述洗涤液为乙醇水溶液，所述洗脱液为Tris-HCl和EDTA，磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠。

优选的，所述裂解结合液由Tris-HCl缓冲液、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30、异丙醇和物质a组成，所述物质a为CTAB或SDS或盐酸胍或异硫氰酸胍中的至少一种；

优选的，所述裂解结合液中，物质a的质量百分含量为1％-5％或摩尔浓度为1M-4M；

优选的，所述裂解结合液中，Tris-HCl浓度为50-200mM，NaCl浓度为50-500mM，EDTA浓度为20-100mM，柠檬酸浓度为0.1-0.5M，柠檬酸三钠浓度为0.2-1M；

优选的，所述裂解结合液中，PVP30的体积百分含量为1-3％，异丙醇的体积百分含量为40％-60％；

优选的，所述洗涤液中乙醇体积分数为50％-80％；

优选的，所述洗脱液为中Tris-HCl浓度为10-30mM，EDTA浓度为0.1-0.5mM；

优选的，所述磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠，粒径为100-1000nm。

优选的，所述物质a为CTAB，所述裂解结合液中，CTAB的质量百分含量为2％；Tris-HCl浓度为50mM；NaCl浓度为500mM；EDTA浓度为40mM；柠檬酸浓度为0.5M；柠檬酸三钠浓度为0.2M；PVP30体积百分含量为1％；异丙醇体积百分含量为50％；

优选的，所述洗涤液中乙醇体积百分含量为75％。