[发明专利]一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒及应用

权利要求书

1.一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的方法，其特征在于，使用基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解结合液、洗涤液、洗脱液和磁珠，所述裂解结合液由SDS、CTAB、盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris-HCl、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30和异丙醇中的至少5种成分组成，所述洗涤液液为乙醇水溶液，所述洗脱液为Tris-HCl和EDTA，磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述裂解结合液由Tris-HCl缓冲液、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30、异丙醇和物质a组成，所述物质a为CTAB或SDS或盐酸胍或异硫氰酸胍中的至少一种；

所述裂解结合液中，物质a的质量百分含量为1％-5％；

所述裂解结合液中，Tris-HCl浓度为50-200mM，NaCl浓度为50-500mM，EDTA浓度为20-100mM，柠檬酸浓度为0.1-0.5M，柠檬酸三钠浓度为0.2-1M；

所述裂解结合液中，PVP30的体积百分含量为1-3％；异丙醇的体积百分含量为40％-60％；

所述洗涤液中乙醇体积分数为50％-80％；

所述洗脱液为中Tris-HCl浓度为10-30mM，EDTA浓度为0.1-0.5mM；

所述磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠，粒径为100-1000nm。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述物质a为CTAB，所述裂解结合液中，CTAB的质量百分含量为2％；Tris-HCl浓度为50mM；NaCl浓度为50mM；EDTA浓度为40mM；柠檬酸浓度为0.5M；柠檬酸三钠浓度为0.2M；PVP30体积百分含量为1％；异丙醇体积百分含量为50％；

所述洗涤液中乙醇浓度为75％；所述洗脱液中Tris-HCl浓度为20mM，EDTA浓度为0.4mM；所述磁珠粒径为800nm。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述洗涤液中乙醇体积百分含量为75％。

5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述洗脱液中Tris-HCl浓度为20mM，EDTA浓度为0.4mM。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取待测口腔拭子保存液，加入裂解结合液、磁珠，充分混匀，室温静置；将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，去掉上清液；

(2)向步骤(1)得到的离心管加入洗涤液，振荡混匀；然后置于磁力架上静置30s，磁珠完全吸附后，去掉上清液；

(3)将离心管从磁力架上取下，加入洗脱液，振荡混匀，加热孵育；将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，取上清DNA溶液低温保存。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的静置室温静置时间为2min；磁力架上静置时间为30s。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的振荡时间为10s；磁力架上静置时间为30s。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中加热温度为56℃，加热时间为1min，加热期间颠倒混匀1次；磁力架上静置时间为30s。

10.权利要求1-5中所述的基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒。