[发明专利]一种采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法在审
申请号: | 202211436087.8 | 申请日: | 2022-11-16 |
公开(公告)号: | CN115851699A | 公开(公告)日: | 2023-03-28 |
发明(设计)人: | 韩蓓;马天有;韩蕾;马鑫鑫;程悦;吕佳;刘丽娟 | 申请(专利权)人: | 西安交通大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/6806;C12N1/20;C12N1/02;C12R1/445 |
代理公司: | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人: | 范巍 |
地址: | 710048 陕*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 采用 乳酸 链球 菌素 提取 耐甲氧 西林 金黄色 葡萄球菌 基因组 dna 方法 | ||
1.一种采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)在培养耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的液体培养基中加入乳酸链球菌素,进行孵育,离心去除上清,收集菌体沉淀;
2)采用DNA提取试剂盒,对菌体沉淀进行裂解,去除RNA与蛋白质,获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA。
2.根据权利要求1所述的采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,所述乳酸链球菌素为市售生物类级别试剂,活性1000000IU/g。
3.根据权利要求1所述的采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,乳酸链球菌素的用量为:每2~3mL液体培养基中加入无菌乳酸链球菌素溶液至乳的酸链球菌素终浓度为1mg/mL。
4.根据权利要求3所述的采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,所述无菌乳酸链球菌素溶液的配制方法如下:取乳酸链球菌素50mg,加入1mL pH值为2的盐酸溶液,涡旋溶解后,2500rpm离心处理1min,上清液经0.22μm过滤器过滤除菌,得到50mg/mL的无菌乳酸链球菌素溶液。
5.根据权利要求1所述的采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,步骤1)中,培养耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的操作如下:将耐甲氧西林金黄色葡萄球菌接种至胰蛋白胨大豆肉汤培养基TSB液体培养基中,37℃,200rpm,摇床震荡过夜培养。
6.根据权利要求1所述的采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,步骤1)中,在37℃下,静置孵育1~2h。
7.根据权利要求1所述的采用乳酸链球菌素提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的方法,其特征在于,步骤2)中,采用试剂盒中的裂解液和蛋白酶K对菌体沉淀进行裂解处理,去除蛋白;采用试剂盒中的RNase A继续处理,去除RNA。
8.乳酸链球菌素作为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA提取增效剂的应用。
9.乳酸链球菌素在制备用于提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA的试剂盒中的应用。
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