[发明专利]链霉亲和素-生物素的结合效率定量测定的方法及应用

权利要求书

1.链霉亲和素-生物素的结合效率定量测定的方法，其特征在于，包括：

使用炔基碘乙酰胺探针标记蛋白质组；

加入荧光素-生物素-叠氮、抗坏血酸钠、BTTAA和CuSO₄；

萃取、洗涤、重悬于待富集缓冲浓缩液中；

溶解、去沉淀，并稀释至富集缓冲液终浓度，得到富集前样品；

将富集前样品与链霉亲和素偶联磁珠富集，富集后的上清液，作为富集后样品；

获取富集前样品和富集后样品的蛋白质荧光信号强度；

对比富集前样品和富集后样品的蛋白质荧光信号强度，得到链霉亲和素-生物素的结合效率；所述荧光素-生物素-叠氮的化学结构如下所示：

；

所述对比富集前样品和富集后样品的蛋白质荧光信号强度，得到链霉亲和素-生物素的结合效率，包括：

使用链霉亲和素-生物素的结合效率的计算模型，获取链霉亲和素-生物素的结合效率，所述链霉亲和素-生物素的结合效率的计算模型如下：

；

其中，E为链霉亲和素-生物素的结合效率。

2.根据权利要求1所述的链霉亲和素-生物素的结合效率定量测定的方法，其特征在于，获取富集前样品和富集后样品的荧光信号强度的步骤，包括：

将富集前样品和富集后样品分别与SDS样品上样缓冲液混合并通过10％SDS-PAGE分离；使用成像系统获取罗丹明荧光及考马斯亮蓝的图像；

根据荧光图像获取富集前样品和富集后样品的荧光信号强度。

3.权利要求1所述的方法在提高链霉亲和素-生物素的结合效率中的应用，其特征在于，所述应用包括：

采用权利要求1所述的方法获取不同种类缓冲液的富集效率，筛选出富集效率高的缓冲液；

将链霉亲和素偶联磁珠间隔固定时间加入。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述富集效率高的缓冲液为溶有0.05%SDS的PBS缓冲液。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述固定时间为1h。