[发明专利]用于黑素瘤术中快速免疫组化的多聚酶-抗体组合

说明书

本发明的发明名称为用于黑素瘤术中快速免疫组化的多聚酶‑抗体组合。本申请涉及用于肿瘤术中快速免疫组化的多聚酶/抗体偶联物及其组合，包含所述多聚酶/抗体偶联物或其组合的试剂盒，以及它们在癌症例如黑素瘤诊断中的应用。

技术领域

本发明主要涉及用于肿瘤的快速鉴别和肿瘤分型，更具体地涉及用于手术中肿瘤如脑瘤、淋巴瘤、黑素瘤和转移癌的快速鉴别和肿瘤分型以及确定肿瘤组织手术切除边际阴性的多聚酶/抗体偶联物及其组合、包含该多聚酶/抗体偶联物和/或其组合的试剂盒、方法及其应用。

发明背景

手术中快速精确鉴别肿瘤对于最佳脑肿瘤切除的重要性

全球每年发生的原发性脑瘤的人数约为250,000人。根据脑肿瘤的组织细胞形态和生长速率，将其从低(I)到高(IV)恶性分级。手术切除脑肿瘤是治疗的第一选择，并且通常是低度脑肿瘤的唯一治疗方法。切除脑肿瘤可降低颅内压以缓解症状，并减少需要通过后续放射治疗或化学疗法治疗的肿瘤块体积。一般需要尽最大的努力在手术过程中清除侵袭性脑肿瘤，否则残留的侵袭性癌细胞会继续生长导致肿瘤复发，从而降低患者的整体生存率。但是，当肿瘤浸润周边脆弱的功能性正常脑组织后，完全清除脑瘤变得几乎不可能^[1]。目前，术前影像学定位和术中精确鉴别肿瘤对于促进最佳肿瘤切除是必需的选择^[2]。大多数非侵入性的脑影相扫描仅能将将大脑肿瘤块精确地定位在毫米级水平。手术过程中仍然需要在组织细胞水平上通过组织形态进行鉴别性癌症诊断，以使外科医生做出切除与否的重要决定。对于恶性脑癌尤其如此。具有百年历史的术中冰冻切片上的苏木精和伊红组织和细胞染色当今仍然是必要的，并且是目前术中脑肿瘤鉴别诊断和边际确定的主要方法。

术中冰冻切片苏木精和伊红染色的固有质量缺陷

在冰冻切片上用苏木精和伊红染色载玻片来鉴定肿瘤的方法仅能依靠病理学家通过在显微镜下进行组织细胞学形态目测检查。因此，冰冻切片组织的苏木精和伊红染色质量一直是决定术中冰冻切片癌症诊断准确性的主要限制因素。本质上，冷冻切片苏木精和伊红染色技术存在两个难以克服的固有问题。第一个问题是冻结产生的缺陷。脑组织的柔软性质和组织冷冻过程中的高水分含量将冰晶引入组织，导致在整个组织内形成冷冻伪影，从而扭曲了细胞形态。例如，冷冻组织经常在少突胶质细胞瘤的核轮廓中产生不规则性，使其看起来与星形细胞瘤相似，因而难以进行区分。冷冻切片苏木精和伊红染色的第二个固有问题是，由于其非特异性化学染色性质，无法分辨基于分子水平差异的组织学结构。这些固有的缺陷给基于冰冻切片的组织形态做诊断的临床病理学家带来了巨大的挑战和负担，他们在很短的时间内仅能够依赖显微组织学形态识别和区分癌症组织。例如，在冷冻切片苏木精和伊红染色方面，区分脑膜瘤、周围神经鞘瘤和梭形细胞增殖是非常困难的。区分反应性神经胶质增生和低度神经胶质瘤是外科神经病理学中最困难的鉴别诊断挑战之一^[3]。脑外科手术中需要明确地区分转移性癌、脑膜瘤、髓母细胞瘤、黑素瘤、胶质瘤、具有IDH1 R132H突变的神经胶质瘤、星形细胞瘤、继发性胶质母细胞瘤等，单一的依靠苏木精和伊红的冰冻切片化学染色无法胜任这些脑瘤组织类型的快速鉴别。

尝试改善脑肿瘤术中诊断的努力

1)相干拉曼散射显微镜技术可将自发拉曼信号放大10,000倍，可进行实时组织学成像，而无需进行组织处理、切片和染色^[4]。这种脑组织成像技术展示了与冰冻切片苏木精和伊红染色结果的某些一致性^[4]。但是该技术特异性有限，未能普遍应用。

2)快速蒸发电离质谱是一项新兴技术，可通过分析电外科解剖过程中释放的气溶胶，对体内人体组织进行近实时表征。仪器仍然非常昂贵。仪器性能是否可以超过冰冻切片苏木精和伊红染色还有待观察^[5]。