[发明专利]M0或M1型Ly6C+CX3CR1+单核细胞来源巨噬细胞在治疗肝纤维化中的用途

说明书

本发明提供了M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺单核细胞来源巨噬细胞在制备肝纤维化药物中的用途。通过实验证实，M0和M1型CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2⁺BMDM和CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2‑BMDM四群细胞均能有效改善四氯化碳肝纤维化小鼠的体重及脏器指数(降低肝体比及脾体比)、减轻炎症反应并减轻肝纤维化程度，证实这四群细胞均能显著减轻肝脏炎症和肝纤维化程度，对于肝损伤后再生起到积极的辅助作用，为肝纤维化的治疗提供了一种新的途径。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺单核细胞来源巨噬细胞在制备肝纤维化药物中的用途、该巨噬细胞的制备方法以及含有该巨噬细胞的药物组合物。

背景技术

肝硬化在我国人群中发病率高达0.51％，全国目前约有700万肝硬化患者，其中每年1-8％的患者进展到肝细胞癌，肝硬化疾病严重威胁人民生命健康。肝硬化可由多种病因引起，包括：HBV和HCV感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病、遗传和代谢性疾病、药物或化学毒物等、寄生虫感染、循环障碍等，这些病因导致健康肝细胞组织和肝脏结构逐渐丧失，肝脏出现弥漫性纤维化、假小叶形成以及肝内外血管增殖。如果清除了导致肝损伤的因素(如病毒、酒精)，肝纤维化可以部分逆转，从而使肝再生得以发生。

实验性肝损伤后肝再生的动物模型表明，巨噬细胞在控制和修复纤维化肝病中起着关键作用。肝脏修复可以通过由骨髓单核细胞分化而来的巨噬细胞进行治疗，但未分化的骨髓单核细胞没有治疗效应。巨噬细胞治疗可以通过调节肝星状细胞凋亡和增加抗炎细胞因子的产生来减轻四氯化碳(CCL4)介导的肝损伤。此外，巨噬细胞介导的基质金属蛋白酶(MMP)释放和吞噬作用对于纤维化瘢痕的解决至关重要。巨噬细胞还能够通过Wnt和TWEAK信号刺激肝祖细胞增殖、分化和补充丢失的肝细胞。因此，过继性巨噬细胞治疗为肝硬化患者提供了一种重要的潜在治疗策略，以促进纤维化的消退。

发明内容

本发明依托上述研究进行，目的在于提供一种M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺单核细胞来源巨噬细胞、其制备方法及在制备肝纤维化药物中的用途，还提供了包含该巨噬细胞的药物组合物。

本发明的第一方面，提供了一种M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺单核细胞来源的巨噬细胞。优选的，该巨噬细胞包括M0或M1型CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2⁺单核细胞来源巨噬细胞、M0或M1型CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2-单核细胞来源巨噬细胞四种细胞。

上述巨噬细胞的制备方法概述如下：从骨髓细胞中分离单核细胞，体外以巨噬细胞诱导培养基培养7天后，再以不加刺激剂的完全培养基培养24小时获得M0型单核细胞来源巨噬细胞(BMDM)，以加脂多糖(LPS)+干扰素γ(IFNγ)刺激剂的完全培养基培养24小时获得M1型BMDM。

具体的，本发明所述巨噬细胞分别从野生型C57小鼠和CCR2^-/-C57小鼠的骨髓细胞培养并诱导分化后获取得到，制备方法如下：