[发明专利]一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用及其提取纯化方法

说明书

本发明公开了一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用及其提取纯化方法，本发明首次从皮落青霉菌种中分离出具有抑制耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的次级代谢产物，该次级代谢产物用于制备耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的药物，具有良好的临床前景。本发明还提供了从皮落青霉菌种中分离次级代谢产物的方法，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明属于抗菌化合物技术领域，具体涉及一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用及其提取纯化方法。

背景技术

海量的海洋生物物种为获取大量结构多样、活性优良的天然产物提供了宝贵资源。

大量的研究报道一些海洋生物的次级代谢产物具有显著的生物活性，包括抗菌、抗病毒、抗心血管、抗肿瘤等等。然而，近年来耐药性问题加剧，使开发出安全性高、活性好且不易耐药的抗生素成为必要。随着生命科学及技术的发展，以微生物来源的次级代谢产物越来越受到人们的关注。

致病菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等，是医院和社区的重要致病菌，可引起各种危及生命的感染，包括坏死性肺炎和皮下脓肿等。由于临床治疗中抗生素的过度使用，金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌等的抗生素耐药性有所增加，研制和发现新型抗生素成为亟需解决的问题。

发明内容

本发明所提取纯化的皮落青霉次级代谢产物，提取自皮落青霉S14菌种(拉丁文名称：Penicillium crustosum)，所述皮落青霉S14菌种来源于南海海泥，保藏编号：CCTCCNO：M 20221447。本发明皮落青霉次级代谢产物分子式为：C₁₅H₁₁NO₃，结构式如式I：

本发明所述皮落青霉S14菌种，如图1和图2所示，菌丝体呈墨绿色，边缘区域呈白色，有色素生成，无渗出液，菌落背面呈黄色，棉兰染色观察，形态特征与青霉属真菌相近，通过提取菌丝体基因组DNA，并进行序列比对，鉴定为皮落青霉菌种。

作为本发明其中一个方面，本发明提供一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用。

优选地，所述皮落青霉次级代谢产物能够抑制耐甲氧西林表皮葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性。

具体地，所述抗菌化合物包括抗菌药物及其盐。

作为本发明的另一个方面，本发明提供所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法，其由以下步骤组成：

S1、制备粗提物：将发酵培养得到的皮落青霉加入乙醇浸泡，抽滤得到滤液，将得到的滤液旋转蒸发到原体积的1/4，按照体积比1∶1加入乙酸乙酯萃取，然后再次旋转蒸发得到发酵浸膏，加入甲醇溶解发酵浸膏，得到粗提物；S2、分离纯化：将所述粗提物用硅胶G层析柱分离，采用100-200目的硅胶G，洗脱梯度依次为：二氯甲烷；二氯甲烷∶甲醇＝80∶1；二氯甲烷∶甲醇＝60∶1；二氯甲烷∶甲醇＝40∶1；二氯甲烷∶甲醇＝20∶1；、二氯甲烷∶甲醇＝10∶1；收集并合并二氯甲烷∶甲醇＝20∶1和二氯甲烷∶甲醇＝10∶1的洗脱梯度所得的洗脱产物进行ODS柱层析纯化，洗脱梯度依次为：水；水∶甲醇＝80∶20；水∶甲醇＝60∶40；水∶甲醇＝40∶60；水∶甲醇＝20∶80；甲醇，将水∶甲醇＝20∶80的洗脱梯度所得的洗脱产物进行高效液相层析纯化，流动相为：甲醇∶水＝1∶1，流速2ml/min，得到淡紫色结晶。

作为本发明所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法的一种优选方案：所述皮落青霉菌种，为皮落青霉S14菌种。

作为本发明所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法的一种优选方案：所述发酵培养，是将皮落青霉S14菌种的种子培养液接种到大米固体发酵培养基中，在黑暗环境下置于培养箱中培养三十天，培养温度为28摄氏度。