[发明专利]党参中过氧白术内酯Ⅲ的提取分离方法及其应用

说明书

本申请公开了分离提取应用技术领域的一种党参中过氧白术内酯Ⅲ(PAT3)的提取分离方法及其在开发辅助减肥和治疗肥胖药物中的应用。利用萃取、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、半制备型高效液相色谱等现代分离方法和技术对党参根茎95％的乙醇提取部分进行分离纯化，并结合现代的波谱方法：质谱(MS)和核磁共振(supgt;1/supgt;H‑NMR、supgt;13/supgt;C‑NMR)，对从党参中鉴定分离得到PAT3。研究发现党参石油醚组分中提取鉴定得到的PAT3可促进成熟脂肪细胞中游离脂肪酸分解，并参与调控脂肪分解相关蛋白的表达，且对脂肪细胞的细胞活力无显著影响。

技术领域

本发明涉及植物的分离提取应用技术领域，具体涉及党参中过氧白术内酯Ⅲ的提取分离方法及其应用。

背景技术

中药党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.Var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川党参Codonopsistangshen Oliv.的干燥根，广泛栽培于我国西北省份甘肃、四川、陕西、贵州、山西等地，主要分布于森林、低山和丘陵等潮湿地区。党参是一种非常著名的多年生药食同源的传统药材，广泛用于脾肺气虚，咳嗽虚喘，气血不足，心悸气短，内热消渴等，因有和人参作为滋补药相似的作用，又被称为“小人参”。现代药理学的许多研究证明，党参有降血脂、降血糖、调节免疫、耐缺氧等药理作用。党参的分离纯化过程较为复杂，很难确定党参小分子中的具体有效成分以及确定其构效关系，目前报道的党参活性成分研究主要集中在多糖、炔苷类、生物碱等党参粗提物部分。

近年来肥胖率的急剧上升给全球的公共卫生网络带来了严重的压力，尽管有饮食与运动上的干预项目，但肥胖症的发生率仍在不断增加。肥胖的特征是体内脂肪(如甘油三酯)在脂肪组织中过度的累积，其发生过程极其复杂。脂代谢的机制中主要包括了脂肪生成与分解以及脂蛋白的合成和分泌等重要过程，其机制的过程中受到了脂肪合成酶和脂肪分解酶以及脂肪合成代谢相关信号通路的调控。因此，如果可以抑制前脂肪细胞向脂肪细胞分化的过程以及促进脂肪细胞的脂解，就可以相应的降低脂肪组织的重量，从而减少肥胖的发生。目前研究较多的调控脂代谢的信号通路主要包括脂联素信号转导通路以及瘦素受体信号通路等，通过干预磷酸腺苷依赖的蛋白激酶(AMPK)、调节脂肪细胞中的脂肪分解、过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARs)等主要通路来达到降脂作用。虽然已有可以预防和治疗糖脂代谢异常导致的肥胖以及相关代谢综合征等，但大多都集中在化学类药物。化学类药物虽然作用机制明确，效果好，但长期使用会产生各种副作用，相比之下，中药类药物具有毒副作用小，结构多样、生物活性强、低毒等优点，因此研究党参小分子单一化合物的生物活性及其相关机制具有重要意义。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，首次从党参中分离纯化得到过氧白术内酯Ⅲ。

本发明的目的之一提供一种党参中过氧白术内酯Ⅲ的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取党参烘干打粉，用乙醇浸渍，采用加热回流提取法提取2～4次，每次提取2～3h，合并提取液减压浓缩，得到党参乙醇总浸膏；

2)将乙醇总浸膏分散于水中，用等体积的石油醚萃取3次，取上层萃取物减压浓缩得到石油醚相浸膏；

3)取石油醚相浸膏用石油醚溶解，与硅胶拌样，待溶剂挥发后作为上柱样品，上低压硅胶色谱柱，分别用石油醚、石油醚：乙酸乙酯1:1、乙酸乙酯、甲醇依次洗脱，分别减压浓缩回收溶剂得到浸膏，合并石油醚：乙酸乙酯＝1:1与乙酸乙酯的洗脱浸膏；