[发明专利]一种从PAG中回收单链核酸的方法

权利要求书

1.一种从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以去离子水和无水乙醇为混合溶剂，以氢氧化钠为溶质，配制溶胀液；

将含有目标片段的聚丙烯酰胺凝胶碎片与所述溶胀液混合后进行孵育，然后收集孵育后的所述聚丙烯酰胺凝胶碎片；

将孵育后的所述聚丙烯酰胺凝胶碎片浸泡于纯水中进行溶胀，得凝胶溶胀液；

对所述凝胶溶胀液进行浓缩、纯化，获取收集物，即获得目标核酸片段。

2.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，以去离子水和无水乙醇为混合溶剂，以氢氧化钠为溶质，配制溶胀液的步骤中：

所述混合溶剂中，所述去离子水和所述无水乙醇的体积比为1:1～4，所述混合溶剂的pH为10～12。

3.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，将含有目标片段的聚丙烯酰胺凝胶碎片与所述溶胀液混合后进行孵育，然后收集孵育后的所述聚丙烯酰胺凝胶碎片的步骤中：

每1mg所述聚丙烯酰胺凝胶碎片对应与5～100mL的所述溶胀液混合。

4.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，将含有目标片段的聚丙烯酰胺凝胶碎片与所述溶胀液混合后进行孵育，然后收集孵育后的所述聚丙烯酰胺凝胶碎片的步骤中：

所述孵育的孵育温度为65～85℃、孵育时间为30～120min。

5.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，将孵育后的所述聚丙烯酰胺凝胶碎片浸泡于纯水中进行溶胀，得凝胶溶胀液的步骤中：

每1mg所述聚丙烯酰胺凝胶碎片对应浸泡于5～25mL的所述纯水中。

6.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，将孵育后的所述聚丙烯酰胺凝胶碎片浸泡于纯水中进行溶胀，得凝胶溶胀液的步骤中：

所述溶胀的溶胀温度为25～37℃、溶胀时间为2～8h。

7.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，对所述凝胶溶胀液进行浓缩、纯化，获取收集物，即获得目标核酸片段的步骤中：

所述浓缩的温度不高于50℃，所述浓缩为浓缩至所述上清液原始体积的1/8～1/10。

8.如权利要求1所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，对所述凝胶溶胀液进行浓缩、纯化，获取收集物，即获得目标核酸片段的步骤中，所述纯化包括：

将浓缩后的所述凝胶溶胀液置于超滤管中进行第一次离心，弃去第一滤过液，而后倒置所述超滤管进行第二次离心，收集第二滤过液；

向所述第二滤过液中加入冷冻的无水乙醇后进行离心，收集沉淀并去除其中残留的无水乙醇。

9.如权利要求8所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，将浓缩后的所述凝胶溶胀液置于超滤管中进行第一次离心，弃去第一滤过液，而后倒置所述超滤管进行第二次离心，收集第二滤过液的步骤中：

所述第一次离心的离心力为12000～16000g、离心时间为8～12min；和/或，

所述第二次离心的离心力为800～1200g、离心时间为8～12min。

10.如权利要求8所述的从PAG中回收单链核酸的方法，其特征在于，向所述第二滤过液中加入冷冻的无水乙醇后进行离心，收集沉淀并去除其中残留的无水乙醇的步骤中：

所述冷冻的无水乙醇的体积为所述第二滤过液体积的4～6倍；和/或，

所述离心的离心转速为10000～14000rpm、离心时间为8～12min。