[发明专利]测定三联吡啶钌浓度的方法和组合物

说明书

本申请涉及测定三联吡啶钌浓度的方法和组合物。本申请提供一种测定三联吡啶钌浓度的组合物，包括链霉亲和素包被磁珠溶液和生物素化抗钌抗体溶液。进一步，提供了一种测定三联吡啶钌浓度的方法，进而能测定标钌抗体上标记三联吡啶钌的个数。该方法能准确、有效、方便地测定标钌抗体上标记三联吡啶钌的个数。该方法可以成为一个稳定的产品检验环节，排除由于标钌不足或过度造成的风险，提升产品的品质和合格率。

技术领域

本申请涉及免疫检测技术领域，具体涉及测定三联吡啶钌浓度的方法和组合物。

背景技术

免疫法是当前体外诊断试剂领域重要的检测手段。主要检测对象是多种多样的蛋白质(抗原)，主要利用了两种抗体与抗原形成“三明治”结构，实现检测目的。在多种多样的免疫检测方法中，电化学发光作为一种高效，精准，方便的检测手段获得了越来越广泛的应用。世界排行第一的罗氏诊断公司的主打产品就是以三联吡啶钌标记抗体为特征的电化学发光产品。该产品广泛应用于肿瘤标志物，心脏标志物，激素，传染病等大量的免疫诊断中。目前中国的很多企业也在开发相同或相似的电化学发光试剂产品。

在该类试剂盒的开发过程中，抗体的标钌过程(即将三联吡啶钌结构的小分子标记到抗体上)是整个工艺的的关键环节。标钌的效果直接影响最终的试剂盒的效果。而且由于绝大多数标钌是利用了抗体中的游离氨基进行反应，标钌过少信号不足，过度的标钌也会造成抗体失去原来的识别抗原的能力。所以标钌的个数需要进行比较严格的控制，标钌太多和太少都不行。目前一般是通过标钌试剂的加入量来控制标上去的钌的个数。由最终做成的试剂盒的性能来评价标钌的效果。然而这种方法只能评价出标钌的成功与否，而到底抗体上标上去了几个钌，需要向哪个方向进行调整的问题是无法回答的。如果能够准确地测定出抗体上标记的三联吡啶钌的个数，将会极大地提升对抗体标记过程和结果的把握，进而准确制订出改进的方向。该测定方法可以成为一个稳定的产品检验环节，排除由于标钌不足或过度造成的风险，提升产品的品质和合格率。

发明内容

基于此，本申请有必要提供一种基于电化学发光技术能够准确、方便的测定样本中三联吡啶钌浓度的方法。进而获得抗体上标记的三联吡啶钌的个数。

具体技术方案如下：

本申请第一方面提供了一种用于测定三联吡啶钌浓度的组合物，包括如下试剂：

试剂RM：链霉亲和素包被磁珠溶液；及

试剂R1：生物素化抗钌抗体溶液。

在其中一个实施例中，所述链霉亲和素包被磁珠的浓度为0.5mg/ml～1.0mg/ml；所述生物素化抗钌抗体的浓度为1μg/ml～10μg/ml。

在其中一个实施例中，所述试剂R1中的生物素与抗钌抗体的摩尔比为1:1～10:1。

本申请第二方面提供了一种试剂盒，包括上述任一项所述的组合物。

可选地，所述试剂盒可用于测定样本中三联吡啶钌浓度或测定标钌抗体上标记三联吡啶钌的个数。

在其中一个实施例中，所述试剂盒与罗氏诊断的e411型电化学发光免疫分析仪配套使用。

本申请第三方面提供了一种测定样本中三联吡啶钌浓度的方法，包括如下步骤：

步骤a：将三联吡啶钌标准品梯度稀释，制成多个不同浓度的标准品溶液。

步骤b：将多个不同浓度的标准品溶液或待测样本作为试剂R2与上述任一项所定义的试剂RM和试剂R1组合成完整的试剂盒，对空白样本进行标准的电化学发光测定，记录测定产生的电化学发光信号强度。

步骤c：根据标准品溶液中的三联吡啶钌摩尔浓度和对应的电化学发光信号强度拟合标准曲线。及

步骤d：根据所述标准曲线和所述待测样本的电化学发光信号强度，得出待测样本中的三联吡啶钌的摩尔浓度。