[发明专利]一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法

权利要求书

1.一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)花粉获取：在父本树上选取花药未散花粉的樱花，用镊子取下花药置于垫有硫酸纸袋的培养皿中，干燥使雄蕊开裂散出花粉，随后将散出的花粉连同花药装入5ml离心管中，4℃冷藏备用或-80℃冷冻保存；

2)去雄方法：授粉前1天选取未开放的大蕾期樱花进行人工去雄，去雄后用硫酸纸袋进行套袋；

3)杂交方法：将冷藏或冷冻的花粉恢复至常温，使用小笔刷蘸取花粉，对已经提前去雄的雌蕊进行授粉，蘸取一次可授3-4朵花，然后进行授粉后处理；

4)获取杂交胚：母本花朵授粉25-30天后，采集幼果，对幼果清洗消毒，转移至托盘中备用；用杂交胚剥离方法获得干净的杂交胚；

5)杂交胚培养获得杂交苗：将杂交胚接种至胚抢救培养基的培养瓶中，接种方式为胚尖朝下，浅插在培养基上，接种后培养30-35天之后将诱导出的苗转入壮苗培养基中进行壮苗培养，30天后将壮苗转移至生根培养基中进行生根培养，25-30天后获得杂交苗；所述胚抢救培养基：MS+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L；所述壮苗培养基：MS+6-BA0.5mg/L+GA3 0.5mg/L+NAA0.2mg/L；所述生根培养基：WPM+IBA1.0mg/L+NAA1.0mg/L；

6)炼苗移栽驯化：生根培养25-30天后，选择4-5片叶，3-4条根的幼苗，将组培瓶打开进行炼苗，使杂交苗生长环境温度、湿度与外界环境一致，7-14天后，清洗掉杂交苗根部残留的培养基，移栽种植，种植后浇透水，转移至小拱棚中保湿，7-15天后打开小拱棚进行正常管理。

2.根据权利要求1所述的一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：步骤1)中，花粉干燥方式：自然散光干燥12-24小时，然后放入干燥皿中干燥8小时。

3.根据权利要求1所述的一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：步骤3)中，授粉后处理：授粉后用硫酸纸袋进行套袋处理，5-7天后去除纸袋，改用尼龙网袋套袋。

4.根据权利要求1所述的一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：步骤4)中，对幼果清洗消毒方法：自来水清洗干净，转移至超净工作台，75％酒精消毒30s-1min，无菌水清洗2-3遍，10％次氯酸钠溶液浸泡消毒8分钟或0.1％HgCl₂溶液浸泡消毒5分钟，无菌水清洗4-5遍。

5.根据权利要求1所述的一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：步骤4)中，杂交胚剥离方法：用手术钳以垂直于果实腹缝线的角度轻轻夹开幼果，用镊子顺夹缝打开种壳，取出种子，再用镊子剥去种皮，获得干净的杂交胚，剥皮过程不能伤及胚尖部位。

6.根据权利要求1所述的一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：步骤5)中，胚抢救培养基中的培养方式为：接种后在温度为25℃-28℃、湿度为70％-80％的无光条件下培养5-7天，随后转移至有光条件下继续培养，培养30-35天之后进行壮苗培养。

7.根据权利要求1所述的一种通过胚抢救技术获得樱花远缘杂交后代的方法，其特征在于：

步骤6)中，移栽种植选择装有泥炭：珍珠岩＝1:1基质的50孔林木高脚穴盘中种植。