[发明专利]一种用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法

权利要求书

1.一种用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，应用于竖置板恒流式生物人工肝反应器中，其特征在于，包括以下步骤：

S1：在所述竖置板恒流式生物人工肝反应器的腔室中按照4×10⁴细胞/cm²的密度种入肝细胞，按照4×10⁴细胞/cm²的密度种入脐带间充质干细胞，在所述竖置板恒流式生物人工肝反应器的凝胶层中进行培养，并静置8小时贴壁；

S2：将血浆采用3000-10000r/min的转速离心去除血细胞，并用0.2μm的低蛋白吸附滤器过滤去除细胞碎片及杂质，得到肝纤维化血浆；

S3：将纤维化血浆与F12细胞培养基以重量比为2:1的比例混合，并将得到的液体灌注进入所述竖置板恒流式生物人工肝反应器的液流通道中进行循环处理；

S4：循环处理完成后，收集纤维化血浆和F12细胞培养基的混合液，并用0.2μm的低蛋白吸附滤器过滤去除细胞碎片，得到治疗血清。

2.如权利要求1所述的用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中，将血浆采用5000r/min的转速离心去除血细胞，并用0.2μm的低蛋白吸附滤器过滤去除细胞碎片及杂质，得到肝纤维化血浆。

3.如权利要求1所述的用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述竖置板恒流式生物人工肝反应器放置在二氧化碳细胞培养箱中，其设置的反应环境为：温度为37℃，二氧化碳浓度为5％，湿度为99％。

4.如权利要求1所述的用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述循环处理的条件为：调节流速使得保持0.5-1.5dynes/cm²的灌注流体剪切力，循环处理的时间为24小时。

5.如权利要求4所述的用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，其特征在于，所述灌注流体剪切力为1.5dynes/cm²。

6.如权利要求1所述的用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，其特征在于，在所述步骤S1中，纤维化血浆保存在-80℃的冷冻环境中。

7.如权利要求1所述的用于肝纤维化治疗的生物人工肝处理血清制备方法，其特征在于，在所述步骤S4中，治疗血清保存在-80℃的冷冻环境中。