[发明专利]一种L-泛解酸内酯水解酶的固定化方法

权利要求书

1.一种L-泛解酸内酯水解酶的固定化方法，包括如下步骤：

将含有镍离子的固定载体与携带组氨酸标签的L-泛解酸内酯水解酶混合，孵育，得到含有固定化的L-泛解酸内酯水解酶的溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定载体是磁性纳米颗粒，优选地，所述磁性纳米颗粒包括铁磁体。

3.根据所述权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磁性纳米颗粒的制备包括如下步骤：将镍盐、铁盐与溶剂混合，调节pH至11～13，在180～200℃条件下反应12～15小时，得到所述磁性纳米颗粒；

优选地，所述镍盐是硝酸镍，所述铁盐是硝酸铁，进一步优选地，所述硝酸镍与硝酸铁的质量比为(0.5～1.0)：(1.5～2.2)，优选(0.6～0.8)：(1.7～2.1)。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述孵育的pH值为6.5～7.5。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述孵育的温度为0～30℃优选2～25℃，和/或所述孵育的时间为8～15小时，优选10～15小时。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，所述固定载体与所述L-泛解酸内酯水解酶的质量比为(4～12)：(3～15)。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征在于，还包括向所述含有固定化的L-泛解酸内酯水解酶的溶液中加入交联剂进行交联反应的步骤，优选地，所述交联剂包括戊二醛。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述戊二醛的质量浓度为1.5％～2.5％；和/或所述交联反应的时间为2～3小时。

9.一种固定化的L-泛解酸内酯水解酶，包括L-泛解酸内酯水解酶和固定载体，优选地，所述L-泛解酸内酯水解酶携带组氨酸标签，所述固定载体包含Ni²⁺，优选地，所述L-泛解酸内酯水解酶与固定载体的质量比为1：(1～2)。

10.根据权利要求9所述的水解酶，其特征在于，所述固定载体是磁性纳米颗粒，优选地，所述磁性纳米颗粒包括铁磁体。