[发明专利]一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法及其应用

说明书

本申请公开了高粱内生菌应用技术领域的一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，包括以下步骤：S1、红缨子糯高粱根处理；S2、母液提取：使用无菌水冲洗无菌研钵，碎根和冲洗液转移到无菌三角瓶中，无菌三角瓶中的液体作为母液；S3、母液稀释：吸取一定量的母液稀释至10‑1的溶液A，吸取一定量的溶液A稀释至10‑2的溶液B,吸取一定量的溶液B稀释至10‑3的溶液C；S4、细菌培养：分别吸取到一定量的溶液A、溶液B和溶液C涂抹在平板上，然后放入培养箱进行倒置培养；S5、菌落保藏：平板上挑选单菌落进行纯化；S6、菌落筛选：菌株进行解钾、固氮、产铁载体能力和产植物激素IAA活性分析。

技术领域

本发明涉及高粱内生菌应用技术领域，具体涉及一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法及其应用。

背景技术

植物内生菌通常指在植物组织中生活某一阶段或所有阶段且不会改变植物的表面特性，不会对寄主植物造成明显疾病症状的微生物。它是植物微生物的重要组成部分之一，包括内生细菌、内生真菌和内生放线菌，主要存在于植物的根、茎、叶、花、果实、种子中，与宿主植物形成共生活寄生的关系，分布范围比较广，种类较多。

目前酱香型白酒是最受欢迎的白酒之一，主要产地是贵州，主要酿酒原料是红缨子糯高粱。但贵州气候特殊气候(多雨少晴)，地形主要以丘陵、山地为主，耕地面积少，在这样的背景条件下，如何利用有限的耕地面积生产出足够多且质量上乘的红缨子糯高粱，以便为各酒企提供充足的酿酒原料。为此，本申请以以茅台镇酱香白酒酿酒原料红缨子糯高粱根为材料，从中筛选内生菌，并通过溶磷、固氮、解钾等对菌株的促生性能进行测定，再通过种子发芽实验、盆栽实验等测定菌株对高粱的促生长能力，筛选出具有多重促生性能且能够促进高粱生长的菌株，为进一步开发高粱生长菌肥、提高酿酒用高粱质量和产量、推动酿酒行业原料的可持续发展奠定理论基础。

发明内容

本发明意在提供一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法及其应用，以提供一种具有多重促生性能且能够促进高粱生长的菌株，以提高高粱质量和产量。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，包括以下步骤：

S1、红缨子糯高粱根处理：高粱根消毒后在无菌研钵中研碎；

S2、母液提取：使用无菌水冲洗无菌研钵，碎根和冲洗液转移到无菌三角瓶中，无菌三角瓶中的液体作为母液；

S3、母液稀释：吸取一定量的母液稀释至10-¹的溶液A，吸取一定量的溶液A稀释至10-²的溶液B,吸取一定量的溶液B稀释至10-³的溶液C；

S4、细菌培养：分别吸取到一定量的溶液A、溶液B和溶液C涂抹在平板上，然后放入培养箱进行倒置培养；

S5、菌落保藏：平板上挑选单菌落进行纯化，使用LB固体培养基将菌株培养2～3d后，养好菌株的LB培养基中加入甘油溶液，刮取菌株装入甘油管保存；

S6、菌落分子生物学：对菌株进行DNA提取、DNA片段扩增和序列比对；

S7、菌落筛选：菌株进行解钾、固氮、溶磷、产铁载体能力、产植物激素IAA活性的分析和植物生长实验，筛选出具有解钾能力、固氮能力、产铁载体能力、产植物激素IAA活性高的一种或者多种菌株。

进一步，所述高粱根消毒时用70％乙醇润洗2min，无菌水冲洗3遍，50％次氯酸钠润洗5min，无菌水冲洗3遍，70％乙醇润洗2min，无菌水冲洗3遍。

进一步，S4中溶液A、溶液B和溶液C分别涂抹2～3个平板。