[发明专利]一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法及其应用

权利要求书

1.一种红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤，

S1、红缨子糯高粱根处理：高粱根消毒后在无菌研钵中研碎；

S2、母液提取：使用无菌水冲洗无菌研钵，碎根和冲洗液转移到无菌三角瓶中，无菌三角瓶中的液体作为母液；

S3、母液稀释：吸取一定量的母液稀释至10-¹的溶液A，吸取一定量的溶液A稀释至10-²的溶液B,吸取一定量的溶液B稀释至10-³的溶液C；

S4、细菌培养：分别吸取到一定量的溶液A、溶液B和溶液C涂抹在平板上，然后放入培养箱进行倒置培养；

S5、菌落保藏：平板上挑选单菌落进行纯化，使用LB固体培养基将菌株培养2～3d后，养好菌株的LB培养基中加入甘油溶液，刮取菌株装入甘油管保存；

S6、菌落分子生物学：对菌株进行DNA提取、DNA片段扩增和序列比对；

S7、菌落筛选：菌株进行解钾、固氮、溶磷、产铁载体能力、产植物激素IAA活性的分析和植物生长实验，筛选出具有解钾能力、固氮能力、产铁载体能力、产植物激素IAA活性高的一种或者多种菌株。

2.根据权利要求1所述的红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，所述高粱根消毒时用70％乙醇润洗2min，无菌水冲洗3遍，50％次氯酸钠润洗5min，无菌水冲洗3遍，70％乙醇润洗2min，无菌水冲洗3遍。

3.根据权利要求2所述的红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，所述S4中溶液A、溶液B和溶液C分别涂抹2～3个平板。

4.根据权利要求3所述的红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，所述S6中解钾分析采用解钾培养基将菌株培养3～5天、固氮分析采用阿须贝培养基将菌株培养3～5天、溶磷分析采用无机磷培养基中，培养3-5天后，产铁载体能力分析采用CAS培养基培养3～5天。

5.根据权利要求4所述的红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，所述植物生长实验包括种子发芽实验和植物盆栽实验。

6.根据权利要求5所述的红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，甘油溶液的浓度为30％。

7.根据权利要求6所述的红缨子糯高粱根内生促生菌的筛选方法，其特征在于，产植物激素IAA活性使用R2A培养基、Salkowski比色液、白瓷版、分光光度计测定。

8.根据权利要求1～7任一项所述的红缨子糯高粱根内生促生菌在促进高粱生长的应用。