[发明专利]一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法

说明书

本发明公开了一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，能够通过一步法消化的方式从小鼠胆囊组织中分离获取小鼠胆囊MSCs，该方法全程在超净工作台内完成，获取胆囊组织后，将胆囊组织放入EP管中剪成小块，HBSS洗两次；弃去上清，加入1.5ml溶液I，用剪刀把胆囊组织剪碎，37℃水浴10分钟；4℃，300g离心5分钟；再次弃上清，加入1.5ml胰酶重悬沉淀后，37℃水浴60分钟，每隔10分钟摇晃一次；4℃，300g离心5分钟；弃去上清，用含10%FBS的DMEM高糖培养基重悬后，移到12孔板中，置于37℃的COsubgt;2/subgt;培养箱中培养过夜。

技术领域

本发明涉及生物科研技术领域，具体的说，一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法。

背景技术

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是近年来备受关注的一种具有自我复制及多向分化潜能的成体组织干细胞，在适宜条件下可被诱导分化为骨、软骨和脂肪等细胞。研究发现，从脂肪、脐带、胎盘等组织中均可分离培养出MSCs。但目前尚无在胆囊壁内分离获取和鉴定间充质干细胞的任何研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，能够通过一步法消化的方式从小鼠胆囊组织中分离获取小鼠胆囊MSCs。

本发明通过下述技术方案实现：一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，包括下述步骤：

1）操作前处理及麻醉；

2）将小鼠固定，打开小鼠腹部，获取胆囊组织；

3）将胆囊组织放入1.5-3ml（优选的为2ml）的EP管中剪成小块，HBSS洗2-3次（优选的为2次）；

4）弃去步骤3）中的上清，加入1.5-3ml（优选的为1.5ml）溶液I，用剪刀把胆囊组织剪碎，37-40℃水浴10-15分钟，优选的37℃水浴10分钟；

5）经步骤4）后，0-4℃，300-500g离心5-10分钟；优选的经上述步骤后4℃，300g离心5min；

6）再次弃上清，加入1.5-3ml胰酶重悬沉淀后，37-40℃水浴60-80分钟；优选的，加入1.5ml胰酶重悬沉淀后，37℃水浴60min；

7）经步骤6）后，0-4℃，300-500g离心5-10分钟；优选的经上述后4℃，300g离心5min；

8）经步骤7）后，弃去上清，用含10%FBS的DMEM高糖培养基重悬后，移到12孔板中，置于37℃的CO₂培养箱中培养过夜。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，特别采用下述设置方式：所述步骤1）具体包括下述步骤：

1.1）1.1）操作前20-30分钟（优选为30min）打开超净台紫外灯和低温水平离心机，随后预热消化液；

1.2）麻醉小鼠，用75%酒精消毒后带入超净台。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，特别采用下述设置方式：所述预热消化液至37-40℃，优选的预热消化液至37℃。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，特别采用下述设置方式：所述步骤2）具体为：将小鼠用胶带固定，先利用剪刀打开小鼠腹部外皮和内皮；随后用棉签将肝脏拨到胸腔侧、肠组织拨到腹腔侧以暴露出胆囊；然后用镊子轻轻夹住胆囊，右手持剪刀自胆囊管和胆总管结合处剪断，即可获得胆囊组织。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，特别采用下述设置方式：在打开小鼠腹部外皮和内皮时，避免器械混用，分别用一套剪刀进行打开处理，防止交叉感染。