[发明专利]一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：包括下述步骤：

1）操作前处理及麻醉；

2）将小鼠固定，打开小鼠腹部，获取胆囊组织；

3）将胆囊组织放入1.5-3ml的EP管中剪成小块，HBSS洗2-3次；

4）弃去步骤3）中的上清，加入1.5-3ml溶液I，用剪刀把胆囊组织剪碎，37-40℃水浴10-15分钟；

5）经步骤4）后，0-4℃，300-500g离心5-10分钟；

6）再次弃上清，加入1.5-3ml胰酶重悬沉淀后， 37-40℃水浴60-80分钟；

7）经步骤6）后，0-4℃，300-500g离心5-10分钟；

8）经步骤7）后，弃去上清，用含10%FBS的DMEM高糖培养基重悬后，移到12孔板中，置于37℃的CO₂培养箱中培养过夜。

2.如权利要求1所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：所述步骤1）具体包括下述步骤：

1.1）操作前20-30分钟打开超净台紫外灯和低温水平离心机，随后预热消化液；

1.2）麻醉小鼠，用75%酒精消毒后带入超净台。

3.如权利要求2所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：所述预热消化液至37-40℃。

4.根据权利要求1或2或3所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：所述步骤2）具体为：将小鼠用胶带固定，先利用剪刀打开小鼠腹部外皮和内皮；随后用棉签将肝脏拨到胸腔侧、肠组织拨到腹腔侧以暴露出胆囊；然后用镊子轻轻夹住胆囊，右手持剪刀自胆囊管和胆总管结合处剪断，即可获得胆囊组织。

5.根据权利要求4所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：在打开小鼠腹部外皮和内皮时，分别用一套剪刀进行打开处理。

6. 根据权利要求1或2或3或5所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：所述溶液I为EBSS/10mM EGTA/1% HEPEs。

7. 根据权利要求1或2或3或5所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：所述胰酶为0.05%Trypsin/EDTA / 100ug/ml DNase I。

8.根据权利要求1或2或3或5所述的一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法，其特征在于：所述步骤6）在水浴时，每隔10-15分钟摇晃一次。