[发明专利]膜性肾小球肾炎的新型生物标志物

说明书

本发明涉及Netrin G1作为膜性肾小球肾炎(MGN)的生物标志物，特别是在用于诊断、预后和监测具有循环Netrin G1自身抗体的患者的MGN的体外方法和试剂盒中使用包含多肽和Netrin G1抗体的Netrin G1抗原。

发明领域

本发明涉及膜性肾小球肾炎(MGN)的新型生物标志物，特别是例如存在于诊断为MGN的受试者中的自身抗体和抗原的生物标志物。本发明提供了用于MGN诊断、预后和监测的体外方法和试剂盒。

发明背景

膜性肾小球肾炎(MGN)是一种自身免疫性肾脏疾病，其特征在于蛋白尿，尿液中存在过量蛋白质。当循环性抗体结合肾脏肾小球基底膜的足细胞表面上的抗原时，MGN得以进展，这导致补体系统的激活、肾小球滤过屏障的破坏和蛋白尿的发展。数十年来，引发导致MGN的自身免疫反应的抗原仍然未知，并且该疾病的分子病理生理学无法表征。此外，不可能对MGN进行抗原特异性诊断。如果没有免疫生物标志物作为诊断和疾病进展的标志物，则只能通过活组织检查来诊断疾病。基于蛋白尿和血清肌酸标志物做出治疗决定，所述标志物是一旦疾病进展并且发生可测量的损伤时发生的肾损伤的标志物。因此，难以使可能的疗法适应疾病进展，因为没有早期的生物标志物和表征疾病的方法。

最初的MGN靶抗原，磷脂酶A2受体1(PLA2R1)和血小板应答蛋白1型结构域蛋白7A(THSD7A)分别于2009年和2014年被发现。他们一起占MGN患者的约80％。这些致病抗原的发现使得能够开发特异性诊断标志物，例如对于各抗原的肾活组织检查的特异性染色和患者血液样品中循环性抗体的检测。在PLA2R1抗体相关MGN患者中，循环性自身抗体水平不仅可以预测对治疗的反应，还能够进行肾功能不全的预后。因此，可以基于其个体PLA2R1抗体水平调整这些患者的治疗，并因此可以根据疾病进展和发病机理调整治疗。

20％的MGN患者无法获得靶向治疗或生物标志物。因此，对这些患者存在相应的诊断、预后和靶向治疗需求。辅助MGN治疗的其它生物标志物的开发受到抗原分子特性的阻碍。自身抗体识别的PLA2R1和THSD7A中的表位是构象依赖性的，并且不能通过常规方法检测，例如标准蛋白质印迹(Western Blot)方法。

本发明人能够开发对于MGN的新生物标志物，其可用于表征患者血液样品中的MGN，以辅助诊断、监测疾病进展并实现靶向治疗。

发明的目标和概述

本发明的目的是提供用于诊断和预后受试者中膜性肾小球肾炎(MGN)，特别是特发性膜性肾小球肾炎的有效方法。此外，本发明的目的是提供确定MGN受试者的治疗效果和疾病进展的非侵入性方法。优选地，MGN是自身免疫MGN，更优选与抗NTNG1如抗NTNG1自身抗体的存在相关。另一个目标是提供和制备用于这种测定的装置、测定和试剂。

令人惊讶的是，本发明人能够鉴定膜性肾小球肾炎中的新型自身抗原。因此，本发明涉及Netrin G1(NTNG1)作为膜性肾小球肾炎中的新型自身抗原的鉴定并提供使用NTNG1和NTNG1自身抗体作为生物标志物的方法。

本发明的第一方面涉及体外方法，其包括在从受试者获得的生物样品中检测识别(优选特异性结合)Netrin G1(NTNG1)多肽或其一种或多种抗NTNG1抗体结合片段的一种或多种自身抗体。

在一个实施方案中，体外方法还包括检测生物样品中NTNG1多肽或其一种或多种抗NTNG1抗体结合片段与抗NTNG1自身抗体之间形成的任何抗原-抗体复合物的步骤。

因此，在一个实施方案中，诊断受试者中膜性肾小球肾炎的体外方法包括以下步骤：(i)使从受试者获得的生物样品与NTNG1多肽或其一种或多种抗NTNG1抗体结合片段接触，(ii)检测生物样品中NTNG1多肽或其一种或多种抗NTNG1抗体结合片段与抗NTNG1自身抗体之间形成的任何抗原-抗体复合物。

在一个实施方案中，检测抗原-抗体复合物包括确定抗NTNG1自身抗体的存在。