[发明专利]一种大肠杆菌表面展示系统的构建方法

说明书

本发明公开一种大肠杆菌表面展示系统的构建方法，涉及合成生物学领域。本发明包括如下的步骤：1)构建第一质粒，所述的第一质粒具有SpyTag和待表达蛋白的融合蛋白基因；2)构建第二质粒，所述的第二质粒具有INPNC和SpyCatcher基因；3)将第一质粒和第二质粒分别转入同一大肠杆菌，获得表面展示待表达蛋白的工程菌。本发明在大肠杆菌中将冰核蛋白INP与SpyCatcher蛋白融合表达，实现对含有SpyTag短肽标签的其他所有蛋白表面展示。因此，本发明为不同蛋白的表面展示提供了一种便捷通用的方法，实现表面展示平台的搭建。

技术领域

本发明属于生物技术领域，同时涉及合成生物学技术领域。具体涉及开发一种通用大肠杆菌表面展示策略。

背景技术

细菌的表面展示可以在细胞表面上呈递蛋白质或者多肽，目前广泛应用于全细胞传感器、原位催化剂、药物载体等领域。表面展示策略的原位酶促反应可以有效避免一些胞内因素影响，同时通过合成生物学方法表面展示的目标蛋白可以自发随着细菌扩增而扩增，无需二次操作。然而，直接表面展示系统若要展示不同的蛋白，需要重新设计质粒并交给公司合成，成本较高；同时直接将锚定蛋白和被锚定蛋白融合很容易对目标蛋白活性造成影响。

发明内容

本发明的主要目的，在于提供一种表面展示不同目的蛋白的通用策略，为搭建工程化表面展示平台提供方法。

本发明的技术方案如下：

一种大肠杆菌表面展示系统的构建方法，包括如下步骤：

1)构建第一质粒，所述的第一质粒具有SpyTag和待表达蛋白的融合蛋白基因；

2)构建第二质粒，所述的第二质粒具有INPNC和SpyCatcher基因；

3)将第一质粒和第二质粒分别转入大肠杆菌，获得表面展示待表达蛋白的工程菌。

进一步，所述第一质粒为表达SpyTag-待表达蛋白的融合蛋白基因插入质粒pSB1C3而得。

进一步，所述的第二质粒为INPNC-SpyCatcher基因插入质粒pSB3K3而得。

进一步，所述第一质粒和第二质粒均具有常启动子。

进一步，所述的大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

进一步，所述第二质粒的序列为SEQ ID NO：1。

进一步，所述的待表达蛋白为eGFP,HisTag-SpyTag-eGFP CDS序列见SEQ ID NO：2。

进一步，还包括步骤4)工程菌培育，待表达蛋白被表达。

进一步，步骤4)中，无需诱导即可表达蛋白。

进一步，步骤4)中，通过菌体表面是否产生绿色荧光来判断异肽键形成。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：