[发明专利]氧化型低密度脂蛋白检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供了一种氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)测定试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品，试剂R1为适合抗原抗体反应的缓冲溶液；试剂R2为含有抗体胶乳偶联物的缓冲液，其中胶乳抗体偶联物包括标记抗人氧化型低密度脂蛋白抗体的大粒径胶乳微球以及小粒径胶乳微球，大粒径胶乳采用抗人OxLDL多克隆抗体，小粒径胶乳采用抗人OxLDL单克隆抗体，大小粒径胶乳微球按一定比例混合而成。本发明试剂盒通过采用大小不同粒径胶乳分别偶联单抗或多抗的方法，使其性能兼顾在测定低OxLDL浓度样本时具有较高的灵敏度，同时在测定高OxLDL浓度样本时具有较宽的线性范围。本试剂盒理化性质稳定，使用便捷，在临床检验学上有着广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生化试剂检测技术领域，具体涉及一种氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)是低密度脂蛋白(LDL)经过一序列氧化反应修饰后形成的产物。LDL内大量多价不饱和脂肪酸在过量自由基及其它致氧因素条件下发生过氧化反应，生成丙二醛，丙二醛与载脂蛋白B中的赖氨酸残基结合，最终形成OxLDL产物。LDL氧化修饰一般发生在动脉内膜层，其氧化过程主要包括多不饱和脂肪酸的脂质分子氧化生成脂质氧化产物和脂质氧化产物与LDL上蛋白氨基酸交联两个过程。

低密度脂蛋白颗粒小，很容易穿过动脉壁，而且低密度脂蛋白很容易被氧化，被氧化后的低密度脂蛋白可以使得内皮细胞损伤，诱导血液中的单核细胞通过内皮间隙，在内膜下分化为巨噬细胞。巨噬细胞摄入氧化型低密度脂蛋白渗入血管内皮下，导致细胞内脂质堆积，形成泡沫细胞，泡沫细胞不断堆积最终形成动脉粥样硬化斑块。

氧化型低密度脂蛋白是斑块特异性脂蛋白，在动脉粥样硬化疾病全程中起关键作用，直接参与动脉粥样硬化的发生和发展：即从单核细胞/巨噬细胞的早期转化为含胆固醇的泡沫细胞，到斑块的晚期发展，如不稳定和破裂。LDL转化为OxLDL是发生和促进动脉粥样硬化的关键生理环节，在动脉粥样硬化病变的早期阶段，当血管内皮损伤后，血液中的单核细胞可以通过内皮间隙，在内膜下转化为巨噬细胞。LDL经氧化修饰成OxLDL后，主要通过与巨噬细胞表面的清道夫受体结合而被吞噬，导致巨噬细胞内脂质堆积，形成泡沫细胞。随着病情的发展，泡沫细胞堆积形成脂质条纹乃至脂质斑块。当脂质斑块发生破裂后，血小板出现黏附、聚集进而形成血栓，导致不稳定型心绞痛、急性心肌梗死和猝死事件发生。因此，氧化型低密度脂蛋白是动脉粥样硬化发生和发展的关键步骤，是心血管疾病的独立的致病因子，检测这个致病性生物标志物对心血管疾病及脂代谢障碍性疾病的预防，监测及早期诊断意义重大。

当前，氧化型低密度脂蛋白在临床及实验室的测定方法有酶联免疫法、免疫层析法，酶联免疫法检测精密度高、准确度好，但操作繁琐、检测耗时长、批间差异较大、检测线性范围较窄，且不能满足医院对检测指标的时效性、可重复性及操作简单等特性方面的要求；免疫层析法操作简单快捷，但其检测结果精密度较差、灵敏度低，属于半定量检测试剂，对检测结果有较大局限性。

因此，如何开发一种准确度好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单快捷的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的技术目的提供了一种氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，该试剂盒采用胶乳免疫比浊方法学，提高了试剂灵敏度高，同时兼具有线性范围宽、重复性好、准确度高等性能指标，适用于检验医学临床应用。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面涉及一种氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2以及校准品，其中试剂R1为OxLDL与抗人OxLDL抗体反应缓冲液；试剂R2为结合有抗人OxLDL抗体的胶乳微球溶液；校准品有缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂以及OxLDL参考品组成，其特征在于，所述试剂R2中包含大小两种粒径的结合有抗人OxLDL抗体的胶乳微球，大粒径为150-500nm直径微球，包被多克隆抗体，小粒径为50-100nm直径微球，包被单克隆抗体。