[发明专利]氧化型低密度脂蛋白检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品：

所述试剂R1为氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)与抗OxLDL抗体反应的缓冲溶液，组分包括：20-200mmol/L缓冲液、pH为5.0-9.0，电解质1-30g/L、表面活性剂1-20g/L、防腐剂0.1-2.0g/L、促凝剂1-50g/L；

所述试剂R2为结合有抗人OxLDL抗体的纳米胶乳微球溶液，组分包括：20-200mmol/L缓冲液、pH为6.0-9.0，电解质1-30g/L、表面活性剂1-50g/L、防腐剂0.1-2.0g/L、稳定剂5-100g/L、包被大小两种粒径的结合有抗人OxLDL抗体的胶乳微球；

所述校准品包括氧化型低密度脂蛋白和基质液，其中基质液包括：20-100mmol/L磷酸盐缓冲液、PH为7.0-8.0，EDTA二钠1.0-10g/L、海藻糖5-50g/L、BSA 2-20g/L、防腐剂0.1-2.0g/L。

2.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的缓冲液为HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种。

3.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1及试剂R2中电解质为NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂、Na₂SO₄、K₂SO₄中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中表面活性剂为吐温-20、吐温-80、EMULGEN A-60、EMULGEN A-90、EMULGEN B-66、EMULGEN 709、Brij-35、Triton X-405、Triton X-114、Triton X-100和GENAPOLX-080、EDTA二钠、EDTA三钠、EDTA二钠锰、胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠、乙二醇、甘油、β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、Thesit、蓖麻油中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中防腐剂为叠氮化钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、Proclin、Krovin、咪唑烷基脲中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中促凝剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中稳定剂为蔗糖、甘露醇、海藻糖、乳糖醇、山梨醇、葡萄糖、BSA、酪蛋白中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2包被有大小两种粒径氧化型低密度脂蛋白抗体胶乳微球，大粒径为150-500nm直径胶乳微球，包被抗体为多克隆抗体，小粒径为50-100nm直径胶乳微球，包被抗体为单克隆抗体，小粒径胶乳微球与大粒径胶乳微球体积比为1：1到1：6。

9.根据权利要求8所述的氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中胶乳微球占总体积质量百分数为0.1％-1％，其中小粒径微球质量百分数为0.05％-0.5％，大粒径微球质量分数为0.1％-1.0％，纳米微球与OxLDL抗体的结合方式为化学交联。

10.一种制备如权利要求1-9所述任一项氧化型低密度脂蛋白测定试剂盒的方法，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和校准品制备；

R1试剂制备：依次加入缓冲液、电解质、表面活性剂、促凝剂、防腐剂混合均匀，调节pH定容，即得试剂R1；

R2试剂制备：

a.依次加入缓冲液、电解质、表面活性剂、稳定剂、防腐剂混合均匀后调节pH，定容得试剂R2缓冲体系；

b.取纳米微球与pH为6.0的缓冲液按体积比1：4混匀，再加入活化剂碳化二亚胺(EDC)混匀，现配现用，并置于30-37℃恒温摇床中150rpm反应30min，得活化胶乳微球；

c.用pH为7.0的缓冲液将氧化型低密度脂蛋白抗体稀释至1mg/mL浓度，向活化胶乳微球溶液中加入稀释后的抗体，混匀，并置于30-37℃恒温摇床中150rpm反应4-6h，得包被抗体胶乳微球溶液；

d.向包被抗体胶乳微球溶液中加入封闭剂，封闭剂为10mmol/L甘氨酸和20％BSA，混匀，并置于30-37℃恒温摇床中反应0.5-1h，离心去上清，沉淀中加入a步骤中R2缓冲溶液超声分散混匀，调PH值定容，即得R2试剂；

校准品制备：依次加入磷酸盐、EDTA二钠、海藻糖、BSA、防腐剂、氧化型低密度脂蛋白混合均匀，调节pH定容，配制校准品，然后给校准品赋值。