[发明专利]弥补OsLOX3敲除水稻株抗瘟性降低及验证方法和应用

权利要求书

1.弥补OsLOX3敲除水稻株抗瘟性降低及验证方法，其特征在于：步骤包括：

(1)生长至三叶一心期的OsLOX3敲除水稻株，按100株水稻喷施15～20mL浓度为100ppm的外源苯丙氨酸溶液，24h取样测定亚麻酸和亚油酸含量；

(2)生长至三叶一心期的OsLOX3敲除水稻株感染稻瘟菌36～48h时，按100株水稻喷施15～20mL浓度为100ppm的外源苯丙氨酸溶液；

(3)步骤(2)喷施后于接种稻瘟菌的36h、48h、72h和96h时取样，测定JA响应基因、防御基因、SA信号基因、活性氧基因和POD基因相对表达量；

(4)步骤(2)喷施后于接种稻瘟菌168h后进行病害调查。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述感染稻瘟菌的时间为48h。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述稻瘟菌的菌株为95234I-1b。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述稻瘟菌的菌株孢子悬浮液的浓度为1×10⁵个/mL。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，稻瘟菌菌株于PDA固体培养基上活化，置于28℃恒温培养箱中活化培养4～5天，用打孔器取活化好的菌丝块于PDA培养基上28℃恒温培养箱进行继代培养，培养4～5天；再用打孔器打取PDA培养基边缘活力好的菌块于PDB液体培养基中，置于28℃恒温摇床中培养3～4天，用移液器吸取500uL菌丝培养液于西梅汁培养基上进行产孢，涂布棒涂抹均匀后置于28℃恒温光照培养箱中黑暗培养3～4天后再光照/黑暗交替12h培养5～6天，待西梅汁培养基上的菌丝由白转黑时，刮去表面菌丝，无菌水沖洗孢子，制成孢子悬浮液，在显微镜下用血球计数板将悬浮液孢子浓度调整为1×10⁵个/mL。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述外源苯丙氨酸溶液为含有0.1％吐温的苯丙氨酸水溶液。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述JA响应基因为OsbHLH35、防御基因为OsPR1a、SA信号基因为OsWRKY45、活性氧基因为OsRBohB和POD基因为OsPOX1。

8.根据权利要求1-7任一项所述方法在水稻育种中的应用。