[发明专利]一种具有免疫调节活性的天麻多糖

说明书

本发明公开一种具有免疫调节活性的天麻多糖，其中天麻多糖RGCP‑2峰位分子量为5215 Da，重均分子量为5631 Da，数均分子量为4472 Da；RGCP‑3峰位分子量为32769 Da，重均分子量为39991 Da，数均分子量为27487 Da；通过紫外分光度法、高效液相色谱法和红外光谱法等方法对天麻多糖RGCP‑2和RGCP‑3的结构进行初步分析，结果显示天麻多糖RGCP‑2和RGCP‑3为α构型吡喃糖，没有三股螺旋结构，天麻多糖RGCP‑2和RGCP‑3能抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO，同时抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内ROS的产生，天麻多糖RGCP‑2和RGCP‑3可作为开发免疫调节药物及功能性食品的重要原料。

技术领域

本发明属于天然产物活性成分制备技术领域，具体涉及一种具有免疫调节活性的天麻多糖。

背景技术

天麻别名赤箭、定风草、独摇兰、离母、合离草，为兰科植物天麻Gastrodia elataBl.的干燥块茎。天麻是多年生共生植物，须与白蘑科密环菌共生。天麻主产于陕西、云南、贵州及四川等地，是我国名贵中药材。我国传统中医认为天麻具有平肝息风、镇静安眠的功效。

免疫刺激被认为是改善老年人以及癌症患者体内防御机制的重要策略之一，免疫刺激性多糖是相对较新的一类生物活性化合物，可以增强身体对病毒和细菌感染的天然抵抗力，或协助治疗免疫力低下的疾病。但是提高人体免疫功能的药物在调节免疫活性的同时也会带来较多副作用，如抗药性、药物依赖性、致畸致癌性等。因而，寻找一种天然高效、无毒性的机体免疫调节剂是当前的热点研究方向。随着人们对天然活性物质研究的逐渐深入，多糖被越来越多的研究者关注，近些年来黄芪多糖、玛咖多糖等均被证实具有良好的免疫调节功效。

多糖是一类天然高分子化合物，是一切生命的有机体必不可少的成分，同维持生物机能密切相关。目前对天麻的研究主要集中在天麻素、酚类和苷类，而天麻多糖也是天麻中重要的活性成分，是除天麻素、对羟基苯甲醇等药效成分外含量最丰富的物质。因此，分离天麻中的多糖，挖掘其活性成分，对天麻药材的深度开发和保障人民生命健康及促进产业发展均具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种从天麻中提取分离的多糖，多糖为白色或者淡黄色絮状粉末，其为RGCP-2或RGCP-3，多糖RGCP-2峰位分子量为5215 Da，重均分子量为5631 Da，数均分子量为4472 Da，多糖RGCP-3峰位分子量为32769 Da，重均分子量为39991 Da，数均分子量为27487 Da。

本发明天麻多糖具有免疫调节活性，当多糖RGCP-2和RGCP-3浓度为12.5~50 μg/mL时，能显著抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO，同时抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内ROS的产生。

本发明目的通过以下技术方案实现：

（1）新鲜天麻清洗干净，蒸至透心无白心，置于40-50 ℃烘箱中烘干，干燥后粉碎；

（2）按照质量体积比g:mL=1:15-25的比例，在步骤（2）天麻粉末中加入蒸馏水，在60 ℃水浴锅中浸提，离心，滤渣反复提取2-4次，收集合并滤液，滤液减压浓缩至原体积1/6；

（3）在步骤（2）浓缩液中加入浓缩液体积3-5倍的无水乙醇，在4 ℃下静置，过滤，收集沉淀物，将沉淀物放置于37 ℃烘箱内，使乙醇挥干，即得天麻多糖粗提物；

（4）在天麻多糖粗提物中加入蒸馏水，60 ℃水浴2 h，离心，除去不溶物，留上清，此步骤重复2次；

（5）取步骤（4）得到的上清液，加入sevage试剂（氯仿:正丁醇=4:1）除蛋白，放至摇床内剧烈震荡，取出倒入分液漏斗中，静置分层，弃除中间相和下相，上相继续加sevege试剂除蛋白，若两相之间的液面有白色物质则继续加sevege试剂除蛋白，若没有白色物质则说明蛋白质基本除干净；

（6）将除蛋白后的糖液转移至透析袋中，每6 h更换一次蒸馏水透析2-3 d；