[发明专利]一种SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法与应用

说明书

本申请涉及生物检测技术领域，具体公开了一种SEC‑HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法。本申请提供的SEC‑HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法包括：采用SEC‑HPLC法检测狂犬疫苗纯度；所述SEC‑HPLC法采用的色谱柱为TSK‑gel凝胶色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲溶液；上述SEC‑HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法能够用于检测Vero细胞基质狂犬疫苗和人二倍体细胞基质狂犬疫苗的纯度。本申请提供的SEC‑HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法具有操作方法简单、重现性好、精密度高等优点。

技术领域

本申请涉及生物检测技术领域，具体涉及一种SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法。

背景技术

狂犬病是一种由狂犬病毒引起的发病率极高的人畜共患疾病，目前预防狂犬病的最有效措施是接种狂犬疫苗。当人体接种狂犬疫苗后，人体血液中会出现狂犬病毒抗体，这些抗体可防止狂犬病毒在细胞间直接传播，减少狂犬病毒的增殖量，同时还能清除游离的狂犬病毒，阻止狂犬病毒的繁殖和扩散，从而达到预防狂犬病的目的。

目前我国对狂犬疫苗的纯度虽然没有明确的规定，但研究发现，狂犬疫苗的纯度与临床的不良反应存在密切关系，狂犬疫苗的纯度越高，不良反应发生的概率相对越小。然而目前并没有对狂犬疫苗产品纯度的标准检测方法。因此，为了避免低纯度的狂犬疫苗产品对临床应用带来不良反应，对狂犬疫苗产品的纯度进行快速、准确地检测是必不可少的环节。

发明内容

为了快速、准确地检测狂犬疫苗纯度，本申请提供一种SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法。

第一方面，本申请提供的SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法，采用如下的技术方案：

一种SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法，包括：配制样品溶液、采用SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度；所述SEC-HPLC法采用的色谱柱为TSK-gel凝胶色谱柱；流动相为磷酸盐缓冲溶液。

本申请提供一种SEC-HPLC法检测狂犬疫苗纯度的方法，该方法只需要将狂犬疫苗稀释至一定浓度，然后以磷酸盐缓冲溶液为流动相、并采用TSK-gel凝胶色谱柱对狂犬疫苗样品溶液进行检测，即可获得狂犬疫苗的纯度，该方法具有操作简单、重现性好、精密度高等优点。

优选地，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.2-8.0，浓度为0.08-0.12mol/L。

本申请将磷酸盐缓冲溶液的pH与浓度控制在上述范围内，能够有效防止样品溶液中目标检测物(灭活的狂犬病病毒蛋白)的解离，便于样品溶液中物质间的有效分离，使得获得的高效液相色谱图的峰形更好，狂犬疫苗纯度的检测结果更加准确、真实。

在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH可以为7.2-7.8或7.8-8.0。

在一个具体的实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH还可以为7.2、7.8或8.0。

在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度可以为0.05-0.08mol/L、0.08-0.1mol/L、0.05-0.12mol/L、0.05-0.15mol/L、0.08-0.1mol/L、0.08-0.12mol/L、0.08-0.15mol/L、0.1-0.12mol/L、0.1-0.15mol/L或0.12-0.15mol/L。

在一个具体的实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度还可以为0.05mol/L、0.08mol/L、0.1mol/L、0.12mol/L或0.15mol/L。

优选地，所述SEC-HPLC法中，检测波长为278-282nm。

本申请将SEC-HPLC法中的检测波长控制在以上范围内，目标检测物则具有较大吸收，检测的精密度更高，获得的高效液相色谱图的目标检测物峰面积的RSD值＜2％，保留时间的RSD值＜0.1％。