[发明专利]快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括PVC底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接在PVC底板上；所述的硝酸纤维素膜上设有检测线T和质控线C，所述的检测线T设置于靠近结合垫的一端，所述的质控线C设置于靠近吸水垫的一端；所述结合垫包被有荧光微球标记的抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体和羊抗兔IgG；所述检测线T包被有抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体；所述质控线C包被有羊抗兔IgG。

2.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:1所示、轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫的制备方法为：

（1）将结合垫采用结合垫封闭液浸泡处理；

（2）将荧光微球用N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后，离心，用硼酸缓冲液重悬，超声使荧光微球分散，随后分别加入抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体、羊抗兔IgG，室温孵育，再加入荧光微球标记物封闭液，室温孵育，离心；用荧光微球标记物保护剂将沉淀重悬，即得抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体标记溶液和羊抗兔IgG的荧光微球标记溶液；

（3）将制备的抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体标记溶液和羊抗兔IgG的荧光微球标记溶液1:1混合后喷洒在封闭好的结合垫上；所述SADS-CoV N蛋白单克隆抗体荧光微球标记溶液组成为：每1ml荧光微球溶液含80µg SADS-CoV N蛋白单克隆抗体；所述羊抗兔IgG荧光微球标记溶液组成为：每1ml荧光微球溶液含100µg羊抗兔IgG。

4.根据权利要求3所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫封闭液为含有5%m/v海藻糖、2%m/v BSA、0.5% v/v Tween-20、0.5%m/v TritonX-100的硼酸溶液。

5.根据权利要求3所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球标记物封闭液为含有10% m/v BSA的超纯水溶液。

6.根据权利要求3所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球标记物保护剂为含有3% m/v蔗糖、1% m/v PVP-40、0.5% v/vTween-20的PBS溶液。

7.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测线T包被有1mg/ml的SADS-CoV N蛋白单克隆抗体。

8.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控线C包被有0.5mg/ml的羊抗兔IgG。

9.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫采用样品垫封闭液浸泡处理；所述样品垫封闭液为含有0.5%v/v Tween-20、2% m/v PEG20000、2% m/v BSA的硼酸溶液。

10.快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备包被有荧光微球标记抗体的结合垫；

（2）将1mg/ml抗SADS-CoV N蛋白单克隆抗体和0.5mg/ml羊抗兔IgG抗体间隔5～8mm喷在硝酸纤维膜上，分别作为检测线T和质控线C；

（3）将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接在PVC底板上，得到检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫试纸条。