[发明专利]一种牛精液稀释液的配制方法

说明书

本发明公开了一种牛精液稀释液的配制方法，步骤如下：首先将包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄和抗菌素的基础液分为等体积的A液和B液，然后根据甘油的用量，从B液中取出与甘油等体积的量加入A液中形成第一液，再将甘油加入剩余的B液中形成第二液。本发明操作简单，所用试剂数量少，本发明配制的稀释液能有效提高精子的抗冻性能，使精子的冻后存活率提高20％，冷冻后精子复苏率提高，解冻后延长精子的存活时间，同时，降低了微生物群落数，本发明的稀释液适宜对鲜精进行稀释和冷冻。

技术领域

本发明属于牛人工授精技术领域，尤其涉及一种牛精液稀释液的配制方法。

背景技术

人工授精技术是养牛业进行品种改良的重要技术，通过充分利用优良牛种的遗传资源，实现良种比例的快速扩增。精液保存是人工授精技术中的重要环节，采集的鲜精液需经过稀释、降温等一系列处理，以提高精子的体外存活率、精液冻后活力和受胎率，稀释液能够供给养分、维持pH、抑制细菌生长等，通过向鲜精液中加入一定的稀释液，能够避免细胞膜受到损害，实现精液的长时间保存，为后续精液的冷冻提供基础。

常规的卵黄稀释液包括缓冲剂非电解质或弱电解质、抗冻保护剂、抗生素、抗氧化剂等，常用的配比方法为：蒸馏水1000mL，柠檬酸钠13g、果糖10g、Tris24g配置溶液，煮沸消毒。降至室温取上液670mL加卵黄200mL、维生素B₁₂ 40mL、维生素E 20mL、甘油70mL、青霉素10万IU、链霉素10万IU。上述配比方法操作过程复杂，所用试剂数量多，精子的抗冻性能和冻后存活率低，解冻后精子的存活时间较短。

发明内容

针对上述背景技术中指出的不足，本发明提供了一种牛精液稀释液的配制方法，旨在解决上述背景技术中现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种牛精液稀释液的配制方法，稀释液包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄、抗菌素和甘油，配制方法如下：

首先将包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄和抗菌素的基础液分为等体积的A液和B液，然后根据甘油的用量，从B液中取出与甘油等体积的量加入A液中形成第一液，再将甘油加入剩余的B液中形成第二液。

其中，蒸馏水与卵黄的体积比为4:1；抗菌素为等体积的青霉素和链霉素。

所述基础液的制备方法为：

(1)将蒸馏水加热至100℃，降温至50℃后加入柠檬酸钠，用磁力搅拌器搅拌均匀，过滤后备用。

(2)“倒蛋法”提取卵黄：将新鲜鸡蛋用酒精消毒后打开，左右倾倒鸡蛋将蛋清倾倒干净，刺破卵黄膜后让卵黄液缓慢流入量筒内，量取一定体积的卵黄。

优选地，所述稀释液中，所述蒸馏水、卵黄、甘油的体积百分含量分别为80％、20％、7％，所述柠檬酸钠和果糖浓度分别为23.2g/L、5g/L，所述抗菌素的用量为50万单位/L。

相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：

本发明公开的牛精液稀释液的配制方法操作过程简单，大大减少了所用试剂的数量；本发明配制的稀释液能有效提高精子的抗冻性能，使精子的冻后存活率提高20％，解冻后延长精子的存活时间70分钟以上，同时，降低了微生物群落数。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一、原料准备

蒸馏水、柠檬酸钠(分析纯)、果糖(分析纯)、新鲜鸡蛋、抗生素(青霉素和链霉素)、甘油(分析纯)。

二、配制本发明稀释液