[发明专利]一种测定硫酸庆大霉素滴眼液中有关物质及庆大霉素C组分的方法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种测定硫酸庆大霉素滴眼液中有关物质及庆大霉素C组分的方法。该方法包括以下步骤：采用高效液相色谱‑电雾式检测器对进样进行分析，分析时采用C₁₈色谱柱，流动相由0.1～0.2mol/L三氟醋酸溶液、甲醇按体积比95～96:4～5组成；喷雾器温度40～60℃，数据采集频率5～10Hz，滤波5.0～10.0s，幂函数1.00～1.50；柱温为30～40℃；进样量为10～25μL；流速为0.5～0.7mL/min。本发明提供的测定方法具有流动相组成简单，色谱峰峰形、分离度良好，定量准确，重复性和回收率良好的特点。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种测定硫酸庆大霉素滴眼液中有关物质及庆大霉素C组分的方法。

背景技术

硫酸庆大霉素(Gentamicin Sulfate)是一种氨基糖苷类广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有良好的抗菌作用。根据庆大霉素分子结构的差异可分为庆大霉素C与庆大霉素A两种，临床上使用的庆大霉素主要由C_l、C_la、C₂和C_2a四个活性组分及其他几个次要组分如西索米星、小诺霉素(庆大霉素C_2b)等组成。硫酸庆大霉素滴眼液最早为美国先灵雅宝分公司于1970年6月获批上市，现已撤市，1984年10月美国Allergan(艾尔健)公司以仿制药申请该剂型获批上市，现仍在产。日本最早由Nitten(尼藤)制药有限公司于1983年7月获批上市。硫酸庆大霉素滴眼液在中国最早上市时间为1984年，首仿企业为陕西榆林制药厂。

由于庆大霉素及其有关物质极性强，无特征紫外吸收，有关物质和组分的测定较为棘手。随着现代检测技术的不断发展，柱前衍生化HPLC法、高效液相色谱蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)与脉冲电化学检测法(HPLC-ECD)均已广泛应用于硫酸庆大霉素及其制剂的有关物质与组分的测定，其中ELSD法从2005年开始被中国药典收载测定硫酸庆大霉素的组分。但柱前衍生化法操作繁琐，影响结果的因素较多；ELSD法灵敏度较低，不利于微量杂质的检出；ECD法稳定性较差，色谱条件严格，需要频繁打磨金电极才能满足灵敏度和精密度要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定硫酸庆大霉素滴眼液中有关物质及庆大霉素C组分的方法，以解决现有方法存在的灵敏度低、操作复杂的问题。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种测定硫酸庆大霉素滴眼液中有关物质及庆大霉素C组分的方法，包括以下步骤：采用高效液相色谱-电雾式检测器对进样进行分析，分析时采用C₁₈色谱柱，流动相由0.1～0.2mol/L三氟醋酸溶液、甲醇按体积比95～96:4～5组成；喷雾器温度40～60℃，数据采集频率5～10Hz，滤波5.0～10.0s，幂函数1.00～1.50；柱温为30～40℃；进样量为10～25μL；流速为0.5～0.7mL/min；

所述有关物质包括西索米星和小诺霉素；所述庆大霉素C组分包括庆大霉素C_l、庆大霉素C_la、庆大霉素C₂和庆大霉素C_2a。

鉴于硫酸庆大霉素滴眼液现行标准中未控制有关物质，无法监督企业是否存在使用劣质原料进行制剂生产，为保证使用的安全性，本发明通过试验摸索建立了高效液相色谱-电雾式检测器法测定硫酸庆大霉素滴眼液中有关物质及庆大霉素C组分的方法，并进行了严谨的方法学验证，方法操作简便、专属性强、灵敏度高，可为硫酸庆大霉素滴眼液的质量控制提供新的技术手段。

本发明提供的测定方法具有流动相组成简单，色谱峰峰形、分离度良好，定量准确，重复性和回收率良好的特点。