[发明专利]一种重组抗菌肽PMAP-37及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组抗菌肽PMAP‑37及其制备方法和应用，所述的抗菌肽PMAP‑37是根据数据库筛选出的抗菌肽基因，并进行毕赤酵母密码子优化后插入pPICZαA中，最后经甲醇诱导表达而得。所得重组抗菌肽活性较好，并且具受温度、pH及酶的影响较小，稳定性较好，能广谱抑菌，在食品保鲜、植物防病害等方面有较好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种重组抗菌肽PMAP-37及其制备方法和应用。

背景技术

抗菌肽具有小分子量，广谱抑菌性及优良的稳定性等优点，具有抗菌、抗病毒、抗癌、促进免疫调节等多种作用，在生物医药、畜牧业、农业、食品等行业都具有潜在的应用前景。PMAP-37抗菌肽来源于猪骨髓细胞，由37个氨基酸组成，对革兰氏阴性及阳性菌均有抑制作用，稳定性较好，在未来拥有良好应用前景。

然而利用生物自身合成抗菌肽的方法合成率太低，传统的天然提取PMAP-37的方法效率低下，会消耗大量财力，无法获得所需用量。

目前，尚无在酵母细胞中高效表达重组PMAP-37抗菌肽的报道。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种重组抗菌肽PMAP-37。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种重组抗菌肽PMAP-37，所述重组抗菌肽氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

作为本发明所述重组抗菌肽PMAP-37的一种优选方案，其中：所述重组抗菌肽碱基序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种重组抗菌肽PMAP-37的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种重组抗菌肽PMAP-37的制备方法，包括，通过酵母菌高效表达获得所述重组抗菌肽PMAP-37。

作为本发明所述重组抗菌肽PMAP-37制备方法的一种优选方案，其中：包括，表达载体重组：

将SEQ ID NO:2所示PMAP-37目的基因进行合成，并连接于pPICZα-A载体上构成重组质粒pPICZα-PMAP-37-A；

重组菌株构建：

用SacI内切酶线性化重组后的质粒pPICZα-PMAP-37-A，并将处理后的质粒转入毕赤酵母GS115中，获得带有目的基因的重组菌株；

表达抗菌肽：

筛选出pPICZα-PMAP-37-A的阳性转化子进行诱导表达，收取发酵后的上清液，获得高浓度抗菌肽。

作为本发明所述重组抗菌肽PMAP-37制备方法的一种优选方案，其中：所述PMAP-37目的基因片段是将PMAP-37抗菌肽原始序列根据酵母表达系统偏好性进行密码子优化，在N端依次加入EcoRI，起始密码子ATG，6个组氨酸标签，以及GATGATGATGATAAG15个碱基，C端依次加入终止密码子TAA及XbaI获得。

作为本发明所述重组抗菌肽PMAP-37制备方法的一种优选方案，其中：所述诱导表达，包括，经1.5％的甲醇诱导，最佳表达时间为5d。