[发明专利]一种基于金修饰新型碳化聚合物量子点作为标记物的夹心型ECL传感器的制备及应用

权利要求书

1.一种基于金修饰的CPDs@ZIF8作为标记物的K₂S₂O₈体系的夹心型ECL免疫传感器的构建包括以下步骤：

(1)用抛光粉将玻碳电极打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，并在-0.2 ~ 0.6 V电位下进行扫描，使峰电位的差值小于100 mV；

(2)将6 μL，2 ~ 5mg/ml超声后的Fe₃O_4/Pt溶液滴加在电极上，4 ℃下干燥；

(3)将6 μL，1 ~ 2 μg/mL CYFRA21-1抗体滴加在电极上，在4 ℃冰箱下干燥之后，用PBS清洗，以除去多余抗体，4 ℃下干燥；

(4)将3 μL，质量分数为1 ~ 2 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA，4 ℃下干燥；

(5)将6 μL，0.0001 ~ 110 ng/mL一系列不同浓度的CYFRA21-1抗原标准溶液滴加于电极上，4 ℃下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，4 ℃下干燥；

(6)将6 μL，1 ~ 3 mg/mL CPDs@ZIF8/Au-Ab₂标记的二抗滴加于电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余二抗，4 ℃下干燥，制得一种CPDs@ZIF8/Au作为标记物的K₂S₂O₈体系的夹心型ECL免疫传感器。

2.如权利1所述的一种基于金修饰的CPDs@ZIF8作为标记物的K₂S₂O₈体系的夹心型ECL免疫传感器，其所述的CPDs@ZIF8/Au材料的制备步骤如下：

(1) CPDs的制备

首先，将1-4 mmol色氨酸与1-4 mmol邻苯二胺溶于10-40 mL超纯水中，然后在上述混合溶液中加入1-4ml H₂SO₄，搅拌2分钟后转移至50 mL 特氟龙内衬高压釜中并在180 °C 下加热 7 小时，待反应釜自然冷却至室温后，用0.22 μm滤膜过滤所得液体并用200-1000D透析袋透析，最后冷冻干燥48h，得到制备的CPDs；

(2) CPDs@ZIF8的制备

将5-20 mL 二甲基咪唑 (0.25 M)和1-4 mL CPDs混合成均一溶液，在上述溶液中快速加入5-20 mL ZnSO₄ (1.0 M)，在室温下搅拌40 min后，通过离心收集沉淀产物，用蒸馏水反复洗涤3次以上，最后，在60℃真空干燥箱中干燥得到ZIF-8/CPDs 纳米粒子；

(3) CPDs@ZIF8/Au的制备

首先制备金纳米粒子，将HAuCl₄（0.01 %，100 mL）溶液加热至沸腾，将1.5 mL质量分数为1%柠檬酸三钠溶液的缓慢加至上述沸腾溶液中，待溶液变为紫红色，将其从热源取出，冷却至室温，并在黑暗中于4°C保存；

将 20-80 mg干燥好的CPDs@ZIF-8添加到 1-4 mL 预制的金纳米溶液中并搅拌10分钟，超声处理30分钟后，将所得混合物离心以去除多余的水和其他离子，然后将离心后获得的固体真空干燥并储存以备将来使用；

(4) CPDs@ZIF8/Au-Ab₂的制备

5-20mg ZIF8@CPDs/Au分散于1ml PBS（pH=7.4）中，将所得溶液与Ab2溶液（10 μg/mL，1ml）在 4°C 下持续振荡24 小时，经10000 rpm 离心后，获得ZIF-8@CPDs/Au- Ab₂ ,储存在 4°C条件下以备进一步使用。