[发明专利]一种慢病毒高效感染人NK细胞的方法在审
| 申请号： | 202211211385.7 | 申请日： | 2022-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN115505600A | 公开（公告）日： | 2022-12-23 |
| 发明（设计）人： | 刘永峰;芦志华 | 申请（专利权）人： | 北京奇迈永华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;A61K39/00;A61P35/02;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京预立生科知识产权代理有限公司 11736 | 代理人： | 朱萍 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区经济技术*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 高效 感染 nk 细胞 方法 | ||
1.一种将目标基因导入NK细胞的方法，所述方法包括使用携带目标基因的病毒对NK细胞进行两次病毒感染的步骤，第一次病毒感染时加入polybrene，第二次病毒感染时加入PMA、IONOMYCIN、polybrene、IL-2；
优选地，所述polybrene的工作浓度是8μg/ml；
优选地，所述PMA的工作浓度是1μg/ml；
优选地，所述IONOMYCIN的工作浓度是0.25μg/ml；
优选地，所述IL-2的工作浓度是150ng/ml。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病毒是慢病毒；
优选地，所述第一次病毒感染时的病毒复数是3-5MOI；最优选地，所述第一次病毒感染时的病毒复数是4MOI；
优选地，所述第二次病毒感染时的病毒复数是5-7MOI；最优选地，所述第二次病毒感染时的病毒复数是6MOI；
优选地，所述第一次病毒感染的持续时间是1-3小时；最优选地，2小时；
优选地，所述第二次病毒感染的持续时间是3-5小时；最优选地，4小时。
3.如权利要求1所述的方法，所述目标基因包括嵌合抗原受体。
4.如权利要求1所述的方法，所述NK细胞是由自行制备的人源NK细胞或是商品化的NK细胞系；
优选地，所述NK细胞系包括NK-92、NKG、YT、NK-YS、HANK-1；
优选地，所述NK细胞是自体细胞或异体细胞；
优选地，所述NK细胞是由干细胞诱导分化得到的，或者自脐带血或外周血分离得到的；
优选地，所述NK细胞的制备方法包括制备单个核细胞的步骤、诱导NK细胞的步骤、收集细胞的步骤；
优选地，所述单个核细胞包括外周血单个核细胞和脐带血单个核细胞；
优选地，所述单个核细胞是外周血单个核细胞；
优选地，所述干细胞包括ESC、iPSC、拟胚体、细胞造血干细胞、神经干细胞、间充质干细胞、皮肤干细胞、脂肪干细胞、脐血干细胞中的一种或多种。
5.一种病毒感染NK细胞的培养系统，所述培养系统包括第一病毒感染单元和第二病毒感染单元，所述第一病毒感染单元中向病毒感染体系中加入polybrene，所述第二病毒感染单元中向病毒感染体系中加入PMA、IONOMYCIN、polybrene、IL-2；
优选地，所述polybrene的工作浓度是8μg/ml；
优选地，所述PMA的工作浓度是1μg/ml；
优选地，所述IONOMYCIN的工作浓度是0.25μg/ml；
优选地，所述IL-2的工作浓度是150ng/ml。
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