[发明专利]通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法

权利要求书

1.一种通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：制备荧光标记物并标记待测抗体，获得荧光标记抗体溶液；

S2：抗原与羊抗鸡IgY分别包被在硝酸纤维素膜上的检测线与质控线；

S3：稀释抗原，建立梯度稀释的抗原溶液；稀释好的抗原溶液分别加入荧光标记抗体溶液，混匀后静置，获得混合物；

S4：将步骤S3中获得的混合物进行反应测试并获得测试结果；

S5：对测试结果进行数据处理，获得拟合曲线，计算获得抗体的解离常数，其倒数即为抗体的亲和力常数数值。

2.根据权利要求1所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S1具体步骤为：

S11制备荧光标记物：对荧光微球颗粒进行清洗、活化，获得荧光标记物；S12标记待测抗体：活化后的荧光微球与抗体偶联，封闭，获得荧光标记抗体溶液。

3.根据权利要求2所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S11的具体步骤为：

S111清洗荧光微颗粒：检查荧光微球颗粒的状况，用移液器取荧光微球颗粒吹打混匀，加入干净的离心管中，再加入PB缓冲液，进行离心后去除上层清液；

S112活化：将清洗后的荧光微球颗粒复溶混匀并超声，加入活化液后震荡混匀，再超声，进行活化反应，清洗并离心获得活化后的荧光微球颗粒。

4.根据权利要求3所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S12的具体步骤为：

S121偶联：将活化后的荧光微球颗粒与抗体进行偶联反应；

S122封闭：将偶联反应后的荧光微球颗粒采用封闭液进行封闭，后采用保存液进行保存，待用。

5.根据权利要求4所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S2的具体步骤为：

S21：配制膜包被液；

S22：将抗原与羊抗鸡IgY分别添加在膜包被液中，并包被在硝酸纤维素膜上，标记为检测线与质控线，45℃过夜烘干。

6.根据权利要求4所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S3的具体步骤为：取10mL的PBS，梯度稀释抗原，建立浓度为0.1nmol/L-1μmol/L的抗原溶液，分别加入荧光微球颗粒标记好的抗体溶液混匀静置15-30min。

7.根据权利要求4所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S5的具体步骤为：将记录的测试结果的荧光值，结合梯度稀释的抗原浓度绘制拟合曲线，获得最强信号一半的点，即对应的抗原浓度即解离常数Kd。

8.根据权利要求4所述的通过荧光免疫层析检测技术测定单克隆抗体亲和力的方法，其特征在于，所述步骤S111具体为：

S1111：用移液器取荧光微球颗粒吹打混匀，加入干净的离心管中；

S1112：加入荧光微球颗粒的两倍体积的PB缓冲液，于4℃的高速冷冻离心机中进行离心，转速为16000rpm/min，离心15min后，用移液器轻轻吸取上清液并去除，获得清洗后的荧光微球颗粒。