[发明专利]一种诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法

说明书

本申请公开了一种诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，包括以下步骤：步骤S1：在超净工作台内用手术刀片切取下香石竹组培苗的幼嫩叶片，并切成叶块，叶块两端留有伤口；步骤S2：将叶块转入诱导培养基中，在黑暗条件下培养30天后，按光照周期12h/d，光照强度为1500‑2000lx进行光照培养，培养温度为25±2℃，叶块两端切口上产生大量不定根，得到香石竹不定根组织。该方法以香石竹叶片为组织培养材料，最明显的优势是愈伤诱导环节，叶片直接产生大量不定根，在短时间内可大量快速繁殖，有效保持了亲本的优良性状，避免品种混杂和病毒在植株体内积累，并且不受季节限制等诸多优点，为香石竹良种苗无性繁殖及解析生长素在不定根发生中的作用机制研究奠定基础。

技术领域

本申请涉及香石竹培育技术领域，特别是一种诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法。

背景技术

香石竹（Dianthus caryophyllus）又名康乃馨、大花石竹、荷兰石竹等，是石竹科（Caryophyllaceae）石竹属（Dianthus L.）多年生草本植物，因其花色娇艳并且散发出芬芳的香气而得名。在世界各国广泛栽培，成为畅销全球的四大鲜切花之一，多用于社交以及装饰环境，康乃馨寓意温馨、热情和母爱，是著名的“母亲节”之花，其需求量位于鲜切花之首。此外，康乃馨全草入药，能清热，利水，破血，通经；花朵可用于提炼精油。当前，对于香石竹的研究主要集中在香石竹植株再生及基因工程、脱毒快繁、脱毒检测技术、切花保鲜方法等方面。

现有香石竹繁育方法主要为扦插、压条、种子繁殖，播种后易产生品种混杂，不能保持原有品种的优良性状；容易造成病毒在植株体内聚集难以去除，病毒病对香石竹植株生长、鲜切花质量和市场价值产生不利影响。

扦插主要采用带侧芽的茎扦插繁殖，扦插侧芽繁殖存在以下问题：

1、由于香石竹带侧芽的茎段数量较少，插穗来源不足，繁殖系数低，繁殖周期长，不能满足市场需求；

2、长期扦插导致植株中病毒积累严重，导致繁殖多代后切花质量下降；例如CN201410383569.0快速高效香石竹再生体系建立方法，其公开方法采用香石竹无菌苗的茎尖为材料，在MS培养基的基础上，配有激素TDZ、NAA实现对无菌苗茎尖的有效诱导，通过茎尖间接再生获得完整植株。该方法中依然采用茎尖部分，可以使用繁殖体材料相对较少在培育香石竹优良性状上有一定的局限性。在多种植物培养体系中添加TDZ表现出能诱导愈伤组织形成，而且大大高于其他植物生长调节物质的细胞增殖速率。

Capele等（1983）的研究表明TDZ诱导愈伤组织生长的速率是其他植物生长调节剂的30倍；另外，外植体在愈伤组织诱导过程中吸收TDZ的量比其他植物生长调节剂少，TDZ不具有明确的诱导香石竹叶片产生不定根的性能。

不定根（AR，Adventitious root）是植物的茎或叶上所发生的根，不定根的发育是一个复杂的生物学过程，受多种内源激素和环境因素的调节，表现为植物的再生反应，其发生难以人为控制，在植株生长的过程中由植物器官受伤或激素、病原微生物等多种外界随机因素刺激后产生。在组织培养中，由愈伤组织长出的根，也称不定根。

不定根的发生扩大了植物的根系，使植物和细胞具有了再生能力，由于生长速率快和次生代谢产物生产能力稳定，不定根组织培养成为有效的植物组织培养方法，对很多园艺作物来说，这些不定根的产生对其无性繁殖都尤为重要。生长素是不定根发生的最关键内源激素，可与其它激素互作调控促进不定根的发育。

采用现有方法结合现有培养基难以诱导香石竹叶片产生不定根，现有技术中无法以香石竹叶片作为繁殖材料进行快速繁殖。

发明内容

本申请提供了一种诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，用于解决现有技术中存在的香石竹以带侧芽茎为扦插材料繁殖材料少，繁殖周期长，现有技术以香石竹叶片无法诱导其产生不定根进行繁殖的技术问题。