[发明专利]一种诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法

权利要求书

1.一种诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1：在超净工作台内用手术刀片切取下香石竹组培苗的幼嫩叶片，并切成叶块，叶块两端留有伤口；

步骤S2：将叶块转入诱导培养基中，在黑暗条件下培养30天后，按光照周期12h/d，光照强度为1500-2000lx进行光照培养，培养温度为25±2℃，光照培养直至叶块两端切口上产生大量不定根，得到香石竹培养组织；

诱导培养基中6-BA添加量为0.5~3mg/L、NAA添加量为0.1~3mg/L、琼脂添加量为6~8g/L、蔗糖添加量为25~30g/L，诱导培养基pH为5.80~6.00；

6-BA添加量为0.6mg/L时，NAA添加量为0.1mg/L；

6-BA添加量为3mg/L时，NAA添加量为3mg/L；

6-BA添加量为0.5mg/L时，NAA添加量为0.5mg/L；

诱导培养基中其余成分为MS培养基，MS培养基中KNO₃添加量为1900mg/L、NH₄NO₃添加量为1650mg/L、KH₂PO₄添加量为170mg/L、MgSO₄.7H₂O添加量为370mg/L、CaCl₂.2H₂O添加量为440mg/L、KI添加量为0.83mg/L、H₃BO₃添加量为6.2mg/L、MnSO₄.4H₂O添加量为22.3mg/L、ZnSO₄.7H₂O添加量为8.6mg/L、Na₂MoO₄.2H₂O添加量为0.25mg/L、CuSO₄.5H₂O添加量为0.025mg/L、CoCl₂.6H₂O添加量为0.025mg/L Na₂EDTA添加量为37.25mg/L、FeSO₄.7H₂O添加量为27.85mg/L、肌醇添加量为100mg/L、甘氨酸添加量为2mg/L、盐酸硫胺素添加量为0.1mg/L、盐酸吡哆醇添加量为0.5mg/L、烟酸添加量为0.5mg/L。

2.根据权利要求1所述的诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，其特征在于，香石竹组培苗培养包括以下步骤：

步骤S11：选择性状以及长势良好的香石竹，剥去枝条外层叶片，剪去较长的叶片，清洗选取的香石竹外植体部分；

步骤S12：在超净工作台中消毒洗净的外植体，放在已灭过菌的盘子中，用滤纸吸去外植体上多余水分，切掉伤口放入灭菌后的外植体培养基中；

步骤S13：外植体在光照培养室内培养25～35d，光照培养室内环境温度为25±2℃，光照周期为12h/d，光照强度为1500-2000lx。

3.根据权利要求2所述的诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，其特征在于，步骤S11中清洗外植体操作为：用毛笔蘸洗衣粉水刷洗干净，再用清水清洗2-3次后，流水冲洗2小时。

4.根据权利要求2所述的诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，其特征在于，步骤S12中消毒操作包括：一次消毒操作和二次消毒操作。

5.根据权利要求4所述的诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，其特征在于，一次消毒操作为：在100ml的无菌水中加入一滴tween和0.1%的升汞混匀后得到消毒液；将外植体放入消毒液中浸泡消毒20min，在此过程中不断摇晃烧杯，浸泡后用无菌水清洗外植体3-5次。

6.根据权利要求4所述的诱导香石竹组培苗叶片直接生成不定根的方法，其特征在于，二次消毒操作为：在100ml无菌水中加入一滴tween和2% NaClO混匀后得到消毒液；将外植体放入消毒液中消毒20min，在此过程中不断摇晃烧杯，浸泡后用无菌水清洗外植体3-5次。