[发明专利]一种检测幽门螺旋杆菌的试纸和试剂盒

说明书

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种检测幽门螺旋杆菌的试纸和试剂盒。所述试纸包括检测线，所述检测线由用于检测幽门螺旋杆菌的单克隆抗体制备而成，所述单克隆抗体由如SEQ ID NO.1所示的抗原作为免疫原制备而成，由该抗原制备得到的单克隆抗体均具有较高的特异性。本发明进一步提供包括该抗原制备得到的单克隆抗体单抗的试纸和相应地试剂盒，其可以快速、准确地实现幽门螺旋杆菌的检测。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种检测幽门螺旋杆菌的试纸和试剂盒。

背景技术

幽门螺杆菌是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌，可能引起胃炎，消化道溃疡，淋巴增生性胃淋巴瘤甚至是胃癌等疾病。

现在检测胃幽门螺旋杆菌(HP)的方法主要有以下几种：第一种是细菌培养法，该方法特异性高，可同时做药敏及耐药试验但同时检验耗时长(2-4天)，工作量大，条件和技术较高，无法检测死菌和活性成分。

第二种是快速尿素酶试验，标本为黏膜活检组织，检测快速，可用于初筛，大约需1小时；但是有创伤性，侵入取样容易增加病人痛苦，需有经验的技术人员。

第三种呼气试验是目前广泛采用的方法。方法简单快速，约需30分钟，并且患者无痛，准确性较高。但是仍然存在设备昂贵，收费高，有放射性，不适合孕妇、婴幼儿、高血压、心脏病人群。

第四种PCR方法虽然灵敏度高，对死菌活菌无要求；但是标本易被污染，假阳性高，操作要求高，需非常有经验的技术人员，侵入取样增加病人痛苦。

第五种酶联免疫吸附试验不能鉴别既往感染及现疫病人，主要适用于流行病学调查。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种检测幽门螺旋杆菌的试纸和试剂盒。

本发明选择了特异性较好的免疫原，幽门螺杆菌含有大量高活性的胞外尿素酶，尿素酶约占全菌蛋白的10％，检测尿素酶可以作为检测幽门螺杆菌的方法。本发明进一步针对尿素酶的29KDa片段上第70～84和128～140的位置的氨基酸位置的抗原表位设计免疫原进行后续单克隆抗体的制备，发现针对该靶点设计的免疫原，制备的单克隆抗体具有较优的特异性。

第一方面，本发明提供一种幽门螺旋杆菌免疫原，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

本发明进一步提供一种制备用于检测幽门螺旋杆菌的单克隆抗体的方法，采用所述的幽门螺旋杆菌免疫原作为免疫原进行制备。

第二方面，本发明提供一种检测幽门螺旋杆菌的试纸，所述试纸条包括检测线，所述检测线包被有所述的单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体的浓度为2mg/mL。

进一步地，所述试纸还包括免疫硝酸纤维素膜，所述免疫硝酸纤维素膜上设有所述检测线和质控线，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。

所述试纸还包括免疫胶体金垫，所述免疫胶体金垫由如下方法制备得到：

制备胶体金；制备胶体金-单克隆抗体复合物，之后包被至载体膜上。

进一步地，所述制备胶体金可采用柠檬酸三钠还原法进行制备，例如包括如下流程：

将0.005～0.015％的HAuCl₄水溶液加热至沸腾，之后加入0.5～1.5％柠檬三钠水溶液；再次加热至沸腾后持续10～15分钟。

进一步地，所述柠檬三钠水溶液的用量为所述HAuCl₄水溶液的0.65～1％(体积比)。

进一步地，所述制备胶体金-单克隆抗体复合物包括：